UTRN與肺癌細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化關(guān)系的研究.pdf

1、前期的研究工作表明，Utrophin（UTRN）是一個(gè)候選的抑癌基因，它在乳腺癌、腎癌、肝癌等多種腫瘤中表達(dá)明顯下調(diào)或缺失。為了進(jìn)一步研究UTRN在肺癌細(xì)胞系的表達(dá)和定位情況，本研究利用半定量RT-PCR方法檢測(cè)了UTRN的表達(dá)，結(jié)果表明在15種肺癌細(xì)胞系中UTRN呈不同程度的表達(dá)下調(diào)，其中4種存在UTRNcDNA7909bp-10277bp處的表達(dá)缺失，6種在此區(qū)域表達(dá)明顯下降。同時(shí)應(yīng)用Westernblotting技術(shù)，對(duì)UTRN蛋

2、白進(jìn)行了定位分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)UTRN在肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、AGZY-83a和Anip973的細(xì)胞核中存在約130kD的截短蛋白（全長(zhǎng)UTRN蛋白約為395kD）。此外，應(yīng)用免疫熒光技術(shù)，與人胚肺細(xì)胞MRC-5比較,在肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549中可見細(xì)胞核區(qū)域存在UTRN的表達(dá)。綜合分析以上研究結(jié)果，提示UTRN在肺癌細(xì)胞中不僅僅是表達(dá)缺失或表達(dá)降低，還存在著UTRN蛋白的轉(zhuǎn)位和截短。
　　為了進(jìn)一步明確UTRN基因?qū)?xì)胞增殖和細(xì)胞骨架的影響

3、，本實(shí)驗(yàn)以易轉(zhuǎn)化、間變型小鼠成纖維細(xì)胞NIH3T3為材料，采用RNAi技術(shù)進(jìn)行UTRN基因的表達(dá)沉默分析。通過繪制細(xì)胞增殖曲線和鬼筆環(huán)肽熒光染色方法，發(fā)現(xiàn)UTRN基因表達(dá)沉默后，與對(duì)照組比較，細(xì)胞增殖速度明顯增加；微絲細(xì)胞骨架數(shù)量明顯減少、結(jié)構(gòu)紊亂，且細(xì)胞表面出現(xiàn)絲足。這些結(jié)果與我們前期以人胚腎HEK293細(xì)胞為材料進(jìn)行的RNA干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致。以上實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)一步揭示了UTRN基因作為抑癌基因在細(xì)胞內(nèi)行使功能，為深入探討UTRN與腫瘤