白血病和消化道腫瘤中ing4和fp248基因表達檢測的臨床意義.pdf

1、目的： 研究ing 4和fp248的表達與消化道腫瘤和白血病的關(guān)系，為消化道腫瘤和白血病的診斷尋找新的指標。 方法： 采用RT-PCR和real-time RT-PCR技術(shù)研究細胞株((成人骨髓間質(zhì)干細胞(hBM-MSC)、胃腺癌細胞株(SGC-7901)、結(jié)腸腺癌細胞株(SW480)、髓系白血病細胞株(U937)等)和白血病患者骨髓或外周血以及胃癌等部分腫瘤組織中ing4和FP248基因表達水平；采用RT-PC

2、R和巢式PCR(nested RT-PCR)技術(shù)檢測消化道腫瘤患者外周血單個核細胞中ing4和fp248基因表達，并采用巢式PCR擴增ALL、AML、CML白血病標本中ING4的第四和第五外顯子接頭附近cDNA和基因組DNA，并對其產(chǎn)物進行測序；采用Western blot技術(shù)和免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry)技術(shù)研究消化道腫瘤組織、白血病患者骨髓或外周血中ING4蛋白質(zhì)表達水平；采用Western印跡技術(shù)研究白

3、血病患者骨髓或外周血中ING4的蛋質(zhì)表達水平。 結(jié)果： ING4基因在SGC、SW480、PC3細胞株中未見表達，在hBM-MMSC中表達較弱，ALL、AML、CML白血病患者骨髓及外周血中ING4的表達均低于健康對照組，76.6％(23/30)胃癌組織、83.3％(5/6)直腸癌組織、100％(7/7)結(jié)腸癌組織中ing4基因表達下調(diào)，分化較好的癌組織中ing4基因表達水平高于分化較差的癌組織，兩年內(nèi)復(fù)發(fā)的胃癌、結(jié)腸癌

4、和直腸癌患者癌組織中ing4基因表達水平低于未復(fù)發(fā)者；在食道癌組織中未能檢測到ing4表達，但在癌旁組織中呈陽性。在白血病骨髓單個核細胞中未發(fā)現(xiàn)ing4基因第4和第5外顯子接頭處突變。Western blot結(jié)果顯示，ING4在ALL、AML、CML白血病患者骨髓和外周血以及胃癌、結(jié)腸癌、直腸癌、食道癌中含量較低，免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，胃癌組織中ING4表達低于癌旁組織。采用RT-PCR研究ing4基因在結(jié)腸癌、直腸癌和胃癌患者外周血單

5、個核細胞中表達水平，結(jié)果患者未見陽性表達，而健康對照組中ing4基因呈陽性。SGC細胞株高表達FP248基因，但A549和PLA801-95D細胞株中fp248基因表達水平很低，U937和SW480細胞株中fp248基因未見表達；RT-PCR和real-time RT-PCR結(jié)果顯示，ALL、AML、CML白血病患者骨髓及外周血中FP248基因的表達水平高于健康對照組，83.3％(25/30)的胃癌組織、100％(6/6)的直腸癌組織、

6、85.7％(6/7)結(jié)腸癌組織中FP248基因的表達高于癌旁組織，表達水平與癌組織分化程度及患者預(yù)后顯著相關(guān)。胃癌、結(jié)腸癌、直腸癌患者手術(shù)前外周血單個核細胞中FP248基因陽性率分別為66.7％、71.4％和100％，手術(shù)l周后陽性率分別為80％、85.7％和100％，根據(jù)nested RT-PCR結(jié)果將患者分成兩組：陽性組和陰性組，陽性組復(fù)發(fā)率高于陰性組。 結(jié)論： ing4基因和fp248基因可能與消化道腫瘤和白血病的