IRAK-M在哮喘中的作用和噻托溴銨治療重度持續(xù)哮喘的療效及安全性.pdf

1、第一部分、IRAK-M在小鼠慢性哮喘氣道高反應(yīng)性和氣道炎癥及重塑中的作用
　　目的：哮喘是一種異質(zhì)性疾病，其特征是持續(xù)性的慢性氣道炎癥，進(jìn)而可導(dǎo)致氣道高反應(yīng)性、粘液高分泌和氣道重塑。白介素-1受體相關(guān)激酶M(Interleukin-1receptor-associated kinase M，IRAK-M)是一種絲/蘇氨酸激酶，在炎癥細(xì)胞因子IL-1誘導(dǎo)下能和IL-1受體相結(jié)合，可對(duì)鐘樣受體(Toll like receptor，T

2、LR)信號(hào)傳導(dǎo)進(jìn)行調(diào)節(jié)，參與調(diào)控多種感染性及非感染性疾病。研究發(fā)現(xiàn)巨噬細(xì)胞、支氣管上皮細(xì)胞、肺泡上皮細(xì)胞等細(xì)胞均可表達(dá)IRAK-M，遺傳學(xué)表明IRAK-M參與早發(fā)持續(xù)性哮喘的發(fā)病，并且哮喘患者氣道粘膜有IRAK-M的高表達(dá)，但是IRAK-M對(duì)哮喘的具體作用及其機(jī)制尚未闡明。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立小鼠慢性哮喘模型，對(duì)以下問(wèn)題進(jìn)行研究:(1)觀察IRAK-M在慢性哮喘小鼠氣道高反應(yīng)性和氣道炎癥及氣道重塑中的作用。(2)探討IRAK-M在哮喘發(fā)病作用

3、中的機(jī)制。
　　方法：將無(wú)特定病原體(Specific pathogen free，SPF)級(jí)C57BL/6雌性小鼠(6-8周)隨機(jī)分為四組:對(duì)照組1（WT/NS組）、對(duì)照組2(KO/NS組)、哮喘組1（WT/OVA組）、哮喘組2（KO/OVA組）。按照致敏和激發(fā)階段建立模型。
　　對(duì)以下指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè):(1)觀察小鼠的一般情況;(2)予不同濃度乙酰甲膽堿進(jìn)行氣道激發(fā)后，采用氣管插管有創(chuàng)肺阻抗方法測(cè)定小鼠的氣道阻力;(3)進(jìn)行

4、支氣管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid，BALF)細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類(lèi);(4)肺組織病理切片分別行HE染色、PAS染色、Masson染色觀察炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、粘液分泌、膠原沉積情況;(5)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme linked immunosorbentassay，ELISA)方法檢測(cè)BALF中炎癥因子濃度;(6) Western blot方法檢測(cè)肺組織中IRAK-M及炎癥相關(guān)蛋白表達(dá);(7) Real-

5、time PCR方法檢測(cè)肺組織中炎癥因子的mRNA表達(dá)水平;(8)測(cè)定肺組織羥脯氨酸含量。
　　使用SPSS20.0和GraphPad Prism software6.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和做圖。
　　結(jié)果：
　　(1) OVA組小鼠飲食、活動(dòng)尚可，但碰觸鼻部較NS組頻繁，部分小鼠有易激惹表現(xiàn)。
　　(2) WT/OVA組小鼠肺組織中IRAK-M在mRNA和蛋白水平表達(dá)較WT/NS組增加。
　　(3) WT/OV

6、A組小鼠氣道反應(yīng)性較WT/NS組增高，KO/OVA組小鼠氣道反應(yīng)性較WT/OVA組降低。
　　(4)肺組織病理HE染色及PAS染色顯示，相較于WT/NS組，WT/OVA組小鼠的肺組織伴有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)增加、氣道粘液分泌增加，KO/OV組小鼠的肺組織炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、氣道粘液分泌較WT/OVA組減輕。
　　(5) WT/OVA組小鼠BALF白細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞較WT/NS組增高，KO/OVA組小鼠

7、BALF白細(xì)胞總數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞較WT/OVA組降低。
　　(6) WT/OVA組小鼠肺組織中IL-4 mRNA、MUC5AC mRNA表達(dá)較WT/NS組增加，IFN-γ mRNA表達(dá)下降;KO/OVA組小鼠肺組織中IL-4 mRNA、MUC5AC mRNA表達(dá)較WT/OVA組下降，IEN-γ mRNA表達(dá)增加。WT/OVA組BALF中IL-4濃度較WT/NS組增高，IFN-γ濃度較WT/NS組降低

8、;KO/OVA組BALF中IL-4濃度較WT/OVA組降低，IFN-γ濃度較WT/OVA組升高;WT/OVA組BALF中IL-13濃度較WT/NS組增高。
　　(7)肺組織病理Masson染色顯示，相較于WT/NS組，WT/OVA組小鼠肺組織膠原纖維沉積增加，KO/OVA組膠原纖維沉積較WT/OVA組減少。WT/OVA組小鼠肺組織羥脯氨酸含量較WT/NS組增多;KO/OVA組小鼠肺組織羥脯氨酸含量較WT/OVA組減少。WT/OVA

9、組小鼠肺組織中TGF-β1 mRNA表達(dá)水平較WT/NS組升高，KO/OVA組小鼠肺組織中TGF-β1 mRNA表達(dá)水平較WT/OVA組下降。WT/OVA組小鼠肺組織中α-SMA蛋白較WT/NS組表達(dá)增加，KO/OVA組小鼠肺組織中α-SMA蛋白較WT/OVA組表達(dá)減少。
　　(8) WT/OVA組小鼠肺組織中NF-κB p65、p-NF-κB p65蛋白表達(dá)較WT/NS組增加，KO/OVA組小鼠肺組織中NF-κBp65、 p-N

10、F-κB p65蛋白表達(dá)較WT/OV組降低。
　　結(jié)論：
　　(1)小鼠慢性哮喘模型中，IRAK-M基因敲除可使氣道高反應(yīng)性、氣道炎癥及氣道重塑減輕，IRAK-M參與了小鼠哮喘的發(fā)病。
　　(2) IRAK-M可通過(guò)活化 NF-κB對(duì)哮喘炎癥進(jìn)行調(diào)節(jié)。
　　第二部分、噻托溴銨治療重度持續(xù)哮喘療效及安全性Meta分析
　　目的：噻托溴銨(tiotropium)是一種長(zhǎng)效抗膽堿受體激動(dòng)劑，主要作用表現(xiàn)在擴(kuò)張支氣

11、管。重度持續(xù)哮喘患者使用糖皮質(zhì)激素及長(zhǎng)效β2受體激動(dòng)劑等藥物治療后仍控制欠佳，在這些藥物基礎(chǔ)上使用噻托溴銨可以擴(kuò)張支氣管，改善氣流受限。本文對(duì)已經(jīng)發(fā)表的有關(guān)噻托溴銨治療重度持續(xù)哮喘的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)(Randomizedcontrolled trial，RCT)進(jìn)行了療效和安全性方面的薈萃分析。
　　方法：計(jì)算機(jī)檢索Cochrane Library、ClinicalTrials.gov、PubMed、Ovid Medline、中國(guó)期刊

12、全文數(shù)據(jù)庫(kù)(CNKI)、維普中文科技期刊全文數(shù)據(jù)(CSJD)，檢索時(shí)間自1946年01月至2015年02月，查找關(guān)于噻托溴銨治療重度持續(xù)哮喘的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn);對(duì)于符合納入標(biāo)準(zhǔn)、排除標(biāo)準(zhǔn)的RCT進(jìn)行資料提取及質(zhì)量評(píng)價(jià);采用Revman5.3軟件對(duì)納入文獻(xiàn)行進(jìn)Meta分析。
　　結(jié)果：共納入5項(xiàng)RCTs，包括1433名患者，結(jié)果顯示，與安慰劑組相比，噻托溴銨組第1秒用力呼氣容積(Forced expiratory volume in o

13、ne second，F(xiàn)EV1)峰值[加權(quán)均數(shù)差(Weighted mean difference，WMD)=0.13 L，95％CI0.10-0.16L，P＜0.00001]、FEV1谷值[WMD0.09 L，95％置信區(qū)間(Confidence interval，CI)0.06-0.12 L，P＜0.00001]、用力肺活量(Forced vital capacity，F(xiàn)VC)峰值(WMD0.10 L,95％CI0.06-0.14 L

14、,P＜0.00001)、FVC谷值(WMD0.12 L,95％CI0.08-0.17 L，P＜0.00001)、晨起呼氣峰值流速(Peak expiratory flow，PEF)(WMD9.21 L/min,95％CI4.2-14.23 L/min, P=0.0003)、夜間PEF(WMD22.06 L/min,95％CI13.05-31.08 L/min，P＜0.00001)等均有改善，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）;哮喘控制問(wèn)卷(

15、Asthma control questionnaire，ACQ)評(píng)分(WMD0.01，95％ CI-0.07to0.09，P=0.86)及哮喘生活質(zhì)量問(wèn)卷調(diào)查(Asthma quality of lifequestionnaire，AQLQ)評(píng)分(WMD-0.06，95％ CI-0.18 to0.06，P=0.33)未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);噻托溴銨組與安慰劑組不良反應(yīng)發(fā)生率未見(jiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：在使用糖皮質(zhì)激素和長(zhǎng)