Rg1聯(lián)合人臍血干細(xì)胞移植治療對放射損傷SCID小鼠造血功能恢復(fù)的影響.pdf

1、目的：觀察人參皂苷Rg1(ginsenosides Rg1，Rg1)聯(lián)合人臍帶血單個核細(xì)胞(humanumbilical cord blood monouclear cells，hUCB-MNCs)移植治療對放射損傷SCID小鼠造血功能恢復(fù)的影響。
　　 方法：密度梯度離心法分離hUCB-MNCs，流式細(xì)胞術(shù)檢測MNCs及造血干細(xì)胞(haemopoietic stem cell，HSCs)含量。亞致死量X線照射制備嚴(yán)重放射性損傷

2、SCID小鼠模型，尾靜脈注射移植，全自動全血細(xì)胞分析儀檢測血象，流式細(xì)胞術(shù)檢測骨髓(bone marrow，BM)和外周血(peripheral blood，PB)中各細(xì)胞亞群變化情況，熒光光度法測定細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度([Ca2+]i)，熒光顯微鏡下觀察抗人細(xì)胞核抗體-FITC標(biāo)記的hUCB-MNCs在骨髓組織的定植、分布情況。
　　 結(jié)果：每份臍帶血所獲得MNCs數(shù)量為(8.62±5.45)×107個細(xì)胞，hUCB-MNC中

3、CD34+細(xì)胞含量為0.65～2.48％。醫(yī)用直線加速器亞致死量X線照射后，SCID小鼠股骨骨髓組織切片HE染色結(jié)果顯示，骨髓組織結(jié)構(gòu)破壞明顯，有核細(xì)胞數(shù)顯著降低，小鼠一般狀況差，模型組和鈣敏感受體阻斷劑CdCl2組小鼠，1周內(nèi)全部死亡。hUCB-MNC移植后，PB血象檢測結(jié)果顯示，血小板數(shù)在放射損傷第14d降至最低，21d開始緩慢恢復(fù)；中性粒細(xì)胞則于第7d降至最低，低水平持續(xù)至14d，21d才開始緩慢恢復(fù)，白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞均

4、在第7d降至最低，14d已開始明顯恢復(fù)，中性粒細(xì)胞、白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞在第28d，一過性恢復(fù)至照射前水平后明顯降低到照射前水平以下。PB紅細(xì)胞在第7d出現(xiàn)短暫下降后，很快又恢復(fù)至正常水平；而中性粒細(xì)胞、血小板、白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞5種血細(xì)胞至第35d仍未恢復(fù)到照射損傷前水平。與模型組比較，hUCB-MNCs移植組BM和PB中Lin-Sca-1+c-kit+細(xì)胞和CD133+flk-1+細(xì)胞千分率明顯升高，CD11b+、Gr-1+細(xì)胞

5、百分率也明顯增高。在hUCB-MNCs移植基礎(chǔ)上Rg1治療后，尤其是Rg1高劑量組，放射損傷小鼠中性粒細(xì)胞、血小板和白細(xì)胞均于細(xì)胞移植后第28d恢復(fù)至空白組正常水平，白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞于第14d、第21d開始恢復(fù)；與MNCs組比較，Rg1治療組上述細(xì)胞的下降較少，且中性粒細(xì)胞和血小板恢復(fù)較好，恢復(fù)時間也明顯提前，骨髓有核細(xì)胞的數(shù)量增加也較明顯，所有實驗動物存活良好。BM中LSK細(xì)胞和PB中CD133+flk-1+細(xì)胞千分率明顯高于MNCs

6、組和空白組；Rg1治療組BM中CD11b+細(xì)胞百分率較模型組高，Gr-1+細(xì)胞百分率也高于模型組和MNCs組，Ter-119+細(xì)胞則以模型組最高，Rg1治療組也高于MNCs組。CaSR激動劑對PB血象、BM及PB的LSK細(xì)胞和CD133+flk-1+細(xì)胞千分率的影響與Rg1高劑量組相似。體外給予Rg10.1～3μ mol/L，可濃度依賴性的增加hUCB-MNCs移植后小鼠骨髓有核細(xì)胞內(nèi)游離鈣水平。hUCB-MNCs移植4w，熒光顯微鏡下

7、檢查發(fā)現(xiàn)，抗人細(xì)胞核抗體MAB1281-FITC標(biāo)記的細(xì)胞散在分布于小鼠骨髓組織中，除Rg1低劑量組分布數(shù)量相對較少外，MNCs組、Rg1和GdCl3組間抗人細(xì)胞核抗體-FITC標(biāo)記細(xì)胞的分布和數(shù)量未見明顯差異。
　　 結(jié)論：Rg1明顯促進(jìn)hUCB-MNCs移植治療放射損傷SCD小鼠造血功能的恢復(fù)，明顯縮短中性粒細(xì)胞和血小板等血細(xì)胞恢復(fù)正常水平的時間，且作用與CaSR激動劑GdCl3相似，其作用機(jī)制可能與增加小鼠骨髓有核細(xì)胞內(nèi)游