HPV16型E7抗原CTL表位模擬肽及初步免疫學(xué)效應(yīng)研究.pdf

1、方法：
　　1、根據(jù)野生表位肽RAHYNIVTF的結(jié)構(gòu)和初步血漿實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定改造部位，將得到的模擬表位肽進(jìn)行分子動(dòng)力學(xué)模擬和結(jié)合自由能的計(jì)算。
　　2、采用標(biāo)準(zhǔn)Fmoc方案固相合成技術(shù)對(duì)表位模擬肽進(jìn)行合成、純化和分子量鑒定。
　　3、運(yùn)用T2細(xì)胞對(duì)野生型表位肽和表位模擬肽與HLA-A2分子親和力進(jìn)行分析。
　　4、采用標(biāo)準(zhǔn)的乳酸脫氫酶方法檢測(cè)人的毒性T淋巴細(xì)胞對(duì)于T2靶細(xì)胞的免疫殺傷效應(yīng)。
　　結(jié)果：

2、r>　　1、根據(jù)表位肽的結(jié)構(gòu)和初步實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分別在將1位和4位點(diǎn)用D型氨基酸單突變和雙突變替換，得到①（d）RAHYNIVTF，②RAHY(d)NIVTF,③（d）RAH（d）YNIVTF3條表位模擬肽。
　　2、分子動(dòng)力學(xué)結(jié)果表明：野生型表位肽和表位模擬肽與MHC-I分子的結(jié)合比較穩(wěn)定，與各個(gè)口袋中氨基酸結(jié)合也比較合理。
　　3、對(duì)合成的表位模擬肽純度和分子量進(jìn)行分析，證明純度均已達(dá)到95％以上，分子量和目標(biāo)化合物相吻合，

3、可為后續(xù)實(shí)驗(yàn)所用。
　　4、親和力實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)野生型表位肽為中等親和力，改造后的①（d）RAHYNIVTFFI值最高，與HLA-A2親和力最強(qiáng)，而另兩條D型改造的模擬肽則完全沒有親和力。
　　5、運(yùn)用乳酸脫氫酶方法對(duì)野生型表位肽和3條表位模擬肽刺激的CTL進(jìn)行殺傷效果測(cè)試，野生型表位肽為57.87%，①表位模擬肽為33.46%，而其他兩條沒有明顯的殺傷效果。
　　結(jié)論：
　　1、采用血漿中穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，首次分析了野生型

4、表位肽的體外半衰期。
　　2、用D型氨酸替換的模擬表位肽可以有效提高在血漿中酶的耐受性。
　　3、體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中證明了①（d）RAHYNIVTF可以誘導(dǎo)CTL產(chǎn)生殺傷作用，但沒有野生型表位肽效果好。
　　從以上結(jié)論得出，雖然改造的①（d）RAHYNIVTF免疫原性降低，但體外半衰期明顯延長(zhǎng)，且親和力也增強(qiáng)，如果通過佐劑或者其他輔助的修飾，以提高其免疫原性，將有可能得到穩(wěn)定，親和力高，免疫效果強(qiáng)的表位模擬肽，為治療性CT