Ets-1在實(shí)驗(yàn)性糖尿病腎病中的表達(dá)及其意義探討.pdf

1、目的： Ets-1通過激活基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）啟動(dòng)因子，在MMPs的調(diào)控中起關(guān)鍵性作用，進(jìn)而影響細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）沉積。但是，Ets-1在以ECM過度沉積為特征的糖尿病腎病（DN）中的作用尚未明確。本實(shí)驗(yàn)通過建立大鼠糖尿病模型，觀察Ets-1、MMP-2、基質(zhì)金屬蛋白酶-2組織抑制劑（TIMP-2）和Ⅳ型膠原（ColⅣ）在糖尿病大鼠腎臟中的表達(dá)，并探討其意義。 方法：雄性6周齡SD大鼠（n=70，體重180±20g），隨

2、機(jī)分成2組：（1）對(duì)照組（NC組，n=30）；給予等量0．1mol/L枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩沖液腹腔注射，（2）糖尿病組（DM組，n=40），一次性腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ，65mg/Kg體重）誘導(dǎo)糖尿病動(dòng)物模型，STZ注射后第1W、4W、8W、12W、16W分別處死各實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物6-8只，監(jiān)測(cè)血糖（BG）、24小時(shí)尿量（24hUV）、體重（BW）及24小時(shí)尿蛋白定量（24Upro），并測(cè)定內(nèi)生肌酐清除率（Ccr）、腎重（KW）及腎重/體重

3、（KW/BW）等指標(biāo)。常規(guī)組織病理學(xué)檢查觀察腎組織病理改變，采用免疫組化檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組大鼠腎組織內(nèi)Ets-1、MMP-2、TIMP-2、ColⅣ及α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）的表達(dá)，并進(jìn)行免疫雙染共定位分析，使用Western blot法，測(cè)定腎組織中Ets-1、MMP-2蛋白質(zhì)水平變化。收集并整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，應(yīng)用單因素方差分析、直線相關(guān)分析等進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，P<0．05為顯著性差異。 結(jié)果： DM組大鼠腹腔一次性注射STZ后，B

4、G迅速升高超過16．7mmol/L，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程維持在25-35mmol/L之間；24hUV較NC組顯著增加；與NC組比較，DM組動(dòng)物KW/BW于STZ注射后第1W開始增加，第16W達(dá)高峰（10．07±1．01 vs3．43±0．19，P<0．05），與STZ注射后第8W，12W相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；24Upro于STZ注射后第1W明顯增加（12．88±0．78 mg/24h vs3．71±0．18 mg/24h，P<0．05），并隨病

5、程延長(zhǎng)持續(xù)性增加；Ccr于第1W開始增加，至第4W達(dá)高峰（8．27±0．72 ml/min/kg vs3．18±0．13 ml/min/kg，P<0．05），第8W開始明顯降低。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中NC組大鼠腎臟未見明顯病理性改變。同NC組相比，DM組大鼠腎臟早期出現(xiàn)腎小球系膜區(qū)擴(kuò)展，第4W、8W系膜細(xì)胞及其基質(zhì)輕度增生及腎小球基底膜增厚，并隨時(shí)間推移病變進(jìn)一步加重。STZ注射后第12W、16W系膜基質(zhì)中重度增生及腎小球硬化，伴局部腎小管擴(kuò)張

6、、萎縮、間質(zhì)內(nèi)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及纖維化形成。免疫組化表明，同NC組相比，Ets-1在腎小球內(nèi)的表達(dá)于STZ注射后第1W明顯增加（4428．25±781．88 vs543．78±139．29，P<0．05），至第4W達(dá)到高峰（8472．34±1082．24 vs570．43±108．18，P<0．05），隨后呈下降趨勢(shì)，16W降至最低。同時(shí)，Ets-1在腎小管間質(zhì)的表達(dá)于STZ注射后第1W亦明顯增加（4294．18±285．78 vs1149

7、．31±98．32，P<0．05），至第8W達(dá)高峰（7343．39±285．01 vs1180．94±117．83，P<0．05）；MMP-2在腎小球內(nèi)的表達(dá)與Ets-1在腎小球內(nèi)的表達(dá)相似，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而MMP-2在腎小管間質(zhì)的表達(dá)與NC組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與NC組比較，TIMP-2在腎小球內(nèi)的表達(dá)于STZ注射后第1W開始增加，并隨病程進(jìn)展持續(xù)性增加，第16W升至最高（2073．93±62．06 vs277．58±36．93，P

8、<0．01），TIMP-2在腎小管間質(zhì)的表達(dá)與其在腎小球內(nèi)的表達(dá)相似，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與NC組比較，腎小球內(nèi)MMP-2/TIMP-2比率于STZ注射后第1W顯著性升高（17．25±1．61 vs7．33±1．74，P<0．01），第4W起明顯下降，第12W、16W時(shí)甚至低于相同時(shí)間點(diǎn)NC組大鼠，有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而腎小管間質(zhì)內(nèi)MMP-2/TIMP-2比率于STZ注射后第4W開始明顯降低（0．29±0．19 vs9．33±3．25，P<0

9、．05），并且隨病程進(jìn)展進(jìn)一步下降；ColⅣ在腎小球內(nèi)的沉積于STZ注射后第1W開始增加，并隨病程進(jìn)展而明顯增加，第16W達(dá)高峰（17658．08±1563．39 vs1727．66±306．64，P<0．05），ColⅣ在腎小管間質(zhì)的表達(dá)與其在腎小球內(nèi)的表達(dá)相似，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；α-SMA在腎小球內(nèi)的表達(dá)于STZ注射后第4W明顯增加，并且隨病程進(jìn)展逐漸增加，第16W升至最高（8742．27±1320．30 vs190．62±62．5

10、7，P<0．05），α-SMA在腎小管間質(zhì)的表達(dá)于STZ注射后第16W明顯增加，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。相關(guān)分析表明，腎小球內(nèi)Ets-1表達(dá)與Ccr呈顯著正相關(guān)（r=0．838，P<0．01），同MMP-2的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=0．856，P<0．01），而與MMP-2/ TIMP-2比率呈負(fù)相關(guān)（r=-0．549， P<0．01）；MMP-2/TIMP-2比率與24Upro呈明顯負(fù)相關(guān)（r=-0．580， P<0．01），同ColⅣ的表達(dá)呈顯

11、著負(fù)相關(guān)（r=-0．701． P<0．01；TIMP-2表達(dá)與α-SMA呈明顯正相關(guān)（r=0．834， P<0．01）。免疫雙染顯示，Ets-1陽性的腎小球固有細(xì)胞及腎小管間質(zhì)細(xì)胞同時(shí)出現(xiàn)MMP-2陽性表達(dá)，TIMP-2染色陽性的腎小球固有細(xì)胞及腎小管間質(zhì)細(xì)胞同時(shí)具有α-SMA陽性表達(dá)。Western blot檢測(cè)表明，Ets-1及MMP-2蛋白水平變化與其免疫組化表達(dá)相一致。 結(jié)論： Ets-1轉(zhuǎn)錄因子可能通過調(diào)節(jié)M