二十碳五烯酸在早期糖尿病腎病中應(yīng)用的實驗研究.pdf

1、目的：n-3多不飽和脂肪酸如二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)在多種腎臟疾病中(包括糖尿病腎病)顯示有益,但其中的確切機制尚不清楚.本研究為觀察EPA對早期階段的2型糖尿病腎病KKA<'y>/Ta小鼠的作用及對體外培養(yǎng)的內(nèi)皮細胞炎癥因子表達的影響. 方法：體內(nèi)實驗中,KKA<'y>/Ta小鼠隨機分為二組:治療組(8只)自12周齡起予以EPA1g/kg/d腹腔內(nèi)注射至20周齡,非治療組(8只)同步予以生理鹽水腹腔內(nèi)注

2、射,BALB/cA小鼠(8只)作為對照組.在12、16和20周齡時檢測小鼠表型變化,在20周齡時同時檢測小鼠血清脂肪酸水平.8周治療后處死小鼠,取腎組織行形態(tài)學(xué)檢查,應(yīng)用免疫組化及圖象分析軟件和Real-time RT-PCR技術(shù)檢測腎臟中巨噬細胞浸潤及單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)、丙二醛(MDA)、硝化酪氨酸(nitrotyrosine)、轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1)和Ⅰ型膠原表達的變化. 體外實驗中,培養(yǎng)原代的人臍靜

3、脈內(nèi)皮細胞(HUVEC),以乳酸脫氫酶(LDH)釋放率確定EPA作用于HUVEC的適合劑量,酶聯(lián)免疫復(fù)合物法檢測EPA對于高糖和脂多糖(LPS)刺激后的內(nèi)皮細胞MCP-1和白介素(IL-6)表達的影響. 結(jié)果：以EPA治療的KKA<'y>/Ta 小鼠血清磷脂中 EPA 水平與未治療組相比顯著升高,證實 EPA 腹腔內(nèi)注射后被充分吸收.EPA 顯著降低了KKA<'y>/Ta小鼠的血清甘油三酯和MDA水平,并減少尿白蛋白的排泄率,改

4、善了葡萄糖不耐受現(xiàn)象.形態(tài)學(xué)和免疫組化檢查顯示EPA治療后KKA<'y>/Ta 小鼠腎小球細胞外基質(zhì)的積聚和小管間質(zhì)纖維化程度顯著減輕,腎臟中巨噬細胞的浸潤及MDA和nitrotyrosine 蛋白表達明顯減弱.免疫組化和Real-time RT-PCR結(jié)果顯示EPA治療組的KKA<'y>/Ta小鼠腎皮質(zhì)MCP-1、TGFβ1和Ⅰ型膠原的蛋白及基因表達量較未治療組顯著降低. 100μmol/l和200μmol/l濃度的EPA引起

5、HUVEC釋放LDH明顯增加,故實驗選取的EPA濃度≤50μmol/lEPA可呈劑量依賴性和時間依賴性抑制LPS誘導(dǎo)的HUVEC分泌MCP-1和IL-6.25mmol/l的D-葡萄糖作用72小時可引起 HUVEC 分泌 MCP-1 增加,作用7天也可引起HUVEC分泌IL-6明顯增加,30μmol/l和50μmol/l二種濃度的EPA均可顯著地抑制高糖誘導(dǎo)的HUVEC分泌MCP-1和IL-6. 結(jié)論：EPA改善了2型糖尿病腎病K