乳腺癌新輔助化療療效與外周血循環(huán)腫瘤細胞變化的初步研究.pdf

1、乳腺癌是女性發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤,復發(fā)和轉(zhuǎn)移仍是導致乳腺癌患者死亡的首要因素。利用現(xiàn)代免疫學和分子分析技術,能在血液中檢測到一種微轉(zhuǎn)移細胞,稱為循環(huán)腫瘤細胞(circulatingtumorcells,CTC)。CTC是乳腺癌發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移的重要環(huán)節(jié)。研究表明,在乳腺癌早期即有CTC進入血液并發(fā)生全身播散。檢測CTC并探討其意義已經(jīng)成為當前臨床研究熱點。既往研究顯示,在乳腺癌患者化療期間,實時檢測外周血CTC水平及變化趨勢有助于評

2、估和預測輔助治療的效果。但目前有關CTC化療療效的研究主要集中在Ⅰ~Ⅲ乳腺癌術后化療和Ⅳ期乳腺癌患者的綜合治療上,而對于CTC與新輔助化療(NeoadjuvantChemotherapy,NCT)療效關系研究較少且存在爭議。另外,不是所有的乳腺癌腫瘤細胞在脫離原發(fā)腫瘤進入血循環(huán)系統(tǒng)中都能存活,存活下來的腫瘤細胞的生物學特性變化是當前研究的熱點之一,本課題擬對上述問題進行初步探討。
　　實驗方法和主要結(jié)果
　　1、乳腺癌外周血

3、循環(huán)腫瘤細胞變化情況與新輔助化療療效關系的初步研究
　　方法:抽取70例乳腺癌患者NCT前后健側(cè)上肢靜脈血5ml,利用密度梯度離心法富集血標本中單個核細胞,通過熒光定量RT-PCR技術檢測所獲得單個核細胞中細胞角蛋白-19(cytokeratin-19,CK-19)陽性的CTC數(shù)目。分析NCT前后CTC表達陽性變化情況與影像學RECIST和病理學Miller-Payne標準評估NCT療效的關系
　　結(jié)果：
　　在70例

4、乳腺癌患者中NCT前外周血CTC檢出率為24.29％(17/70),與患者年齡(P=0.008)及HER-2(P=0.029)表達情況有關,NCT后外周血CTC檢出率為10.00%(7/70)。根據(jù)NCT前后CTC檢測情況,將患者分為陽性-陽性、陽性-陰性、陰性-陽性及陰性-陰性等四組,以RECIST標準評估NCT時,四組有效率分別66.67%(2/3)、78.57%(11/14)、0(0/4)和71.43%(35/49),差異具有統(tǒng)計

5、學意義(P=0.023);以Miller-Payne標準評估NCT療效時,四組有效率分別為66.67%(2/3)、71.43%(10/14)、0(0/4)和69.39%(34/49),差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.043)。
　　2、乳腺癌MCF-7細胞系抗失巢凋亡特性的初步研究
　　方法:利用流式細胞儀檢測正常培養(yǎng)的乳腺癌MCF-7細胞和低粘附培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)24h、48h、72h、120h、168h后MCF-7細胞的凋亡率。

6、利用CCK-8法和transwell小室檢測具備抗失巢凋亡能力的MCF-7細胞的增殖、遷移能力,并對比抗失巢凋亡MCF-7細胞與正常培養(yǎng)的MCF-7細胞克隆形成能力。利用流式細胞分選抗失巢凋亡MCF-7細胞和正常MCF-7細胞中兩群細胞CD44+/CD24-/low比例檢測
　　結(jié)果：
　　通過流式細胞儀檢測發(fā)現(xiàn)乳腺癌MCF-7細胞經(jīng)過低粘附環(huán)境培養(yǎng)后,24h凋亡率為12.35%,48h為31.6%,72h為40.7%,12

7、0h為44.0%,1w為48.9%。具備抗失巢凋亡能力的MCF-7細胞的遷移能力(實驗組VS對照組:275±13VS55±16)、增殖能力(96hOD值實驗組VS對照組:3.09±0.27VS2.31±0.18))及克隆形成能力(實驗組VS對照組:32±3VS3±1)均顯著強與普通MCF-7細胞(P<0.05),并且抗失巢凋亡MCF-7細胞能夠富集較多的乳腺癌腫瘤干細胞(實驗組VS對照組:80.93±1.19%VS2.85±1.86%)