宿主限制因子和自噬在原型泡沫病毒建立潛伏感染中的作用.pdf

1、泡沫病毒(foamy viruses,FVs)是一類復(fù)雜而又獨(dú)特的反轉(zhuǎn)錄病毒,其轉(zhuǎn)錄調(diào)控和生活周期均存在諸多獨(dú)特之處。泡沫病毒感染體外培養(yǎng)的細(xì)胞可以引發(fā)強(qiáng)烈的細(xì)胞病變,但在機(jī)體中不表現(xiàn)任何病癥,處于長期的潛伏感染狀態(tài)。目前普遍認(rèn)為泡沫病毒的潛伏感染可能是機(jī)體多層次、多水平的抗病毒作用的結(jié)果,但其具體機(jī)制尚不清楚。本研究以原型泡沫病毒(prototypic foamy virus,PFV)為材料,從宿主細(xì)胞的一種限制因子tetherin和

2、一種抗病毒的細(xì)胞進(jìn)程細(xì)胞自噬入手,研究泡沫病毒與宿主間的相互作用,初步揭示宿主因素在原型泡沫病毒建立潛伏感染中的作用,從某一層面闡明泡沫病毒的潛伏機(jī)理。
　　 Tetherin是一種新型的抗病毒因子,它是一種干擾素誘導(dǎo)蛋白,可以抑制多種包膜病毒的釋放。研究發(fā)現(xiàn),tetherin的抗病毒作用具有一定的廣譜性,而許多病毒已經(jīng)進(jìn)化出抵抗tetherin的方法。對(duì)于泡沫病毒與tetherin的關(guān)系,目前尚不明了,這是本研究所關(guān)注的主要內(nèi)

3、容之一。本研究利用指示細(xì)胞系、上清中病毒Gag蛋白的表達(dá)及病毒基因組拷貝數(shù)的分析來指示tetherin對(duì)PFV的抑制作用。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),tetherin可以抑制PFV的釋放,且這種抑制作用可以被HIV-1的Vpu蛋白所拮抗。Tetherin的跨膜區(qū)(transmembrane domain,TM)及糖基磷脂酰肌醇(glycosyl phosphatidylinositol,GPI)錨定區(qū)對(duì)其抑制PFV發(fā)揮著十分重要的作用,而其二聚化和糖

4、基化則不是必需的。來源于人、猴、牛和狗的tetherin均可抑制PFV的釋放;而且與人tetherin類似,猴源tetherin的跨膜區(qū)和GPI錨定區(qū)對(duì)其發(fā)揮抑制作用也是十分重要的。此外,本研究并未發(fā)現(xiàn)PFV存在可以抵抗tetherin的機(jī)制,PFV的感染則可以增加潛伏感染的HeLa細(xì)胞內(nèi)tetherin的表達(dá),這可能是PFV在HeLa細(xì)胞中潛伏感染的原因之一。
　　 細(xì)胞自噬是真核細(xì)胞降解損壞的細(xì)胞器和長半衰期蛋白的一種蛋白降

5、解途徑,對(duì)維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定具有重要的作用,同時(shí)也是細(xì)胞天然免疫的一部分,在抵抗病原體感染等過程中發(fā)揮著重要的作用。但由于細(xì)胞自噬的高度保守性,許多病原體進(jìn)化出逃避細(xì)胞自噬的識(shí)別,甚至可以利用細(xì)胞自噬為病毒的復(fù)制增殖服務(wù)的策略。為了研究泡沫病毒與細(xì)胞自噬的關(guān)系,我們利用westernblotting檢測LC3 II的表達(dá)及激光共聚焦顯微鏡定量含有自噬泡結(jié)構(gòu)的細(xì)胞數(shù)來指示細(xì)胞的自噬水平。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),PFV感染293T細(xì)胞可以誘發(fā)細(xì)胞自