二氫卟吩e6聲動(dòng)力對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231生長的作用.pdf

1、乳腺癌的發(fā)病率和死亡率現(xiàn)已居我國女性惡性腫瘤的第一位,是危害婦女健康的主要惡性腫瘤。目前的治療手段包括手術(shù)治療、放射治療、化療藥物治療、內(nèi)分泌治療以及分子靶向治療的綜合治療。乳腺癌初始治療后的5年生存率約50％～60％,但仍有近50％患者治療后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移?；熓菑?fù)發(fā)轉(zhuǎn)移乳腺癌的主要治療手段,但療效已達(dá)平臺(tái)。聯(lián)合用藥可以提高有效率和延長無病生存期,但是聯(lián)合用藥并不能明顯延長總生存期[1]。而且化療在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí),亦不加選擇地殺傷正常細(xì)

2、胞,毒副作用大,病人難以承受而不能堅(jiān)持治療。內(nèi)分泌治療的重要性雖已提高到與化療、放療同等高度,但受到雌激素受體和乳腺癌分型的限制,在雌激素受體陰性、高轉(zhuǎn)移、高度惡性的乳腺癌分型中療效并不明顯。晚期乳腺癌缺乏療效確切的治療方法,中位生存期短,患者平均生存時(shí)間僅18～30個(gè)月。因此,尋找治療乳腺癌的新方法,仍然是當(dāng)今醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)。
　　 聲動(dòng)力療法(Sonodynamic therapy,SDT)是在光動(dòng)力療法(Photodyna

3、mictherapy,PDT)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種腫瘤治療新理念、新方法。SDT 將組織穿透力強(qiáng)的超聲替代了PDT的激光,利用腫瘤組織對(duì)聲敏劑的優(yōu)先攝取和長時(shí)間的滯留的特性,隨后用一定頻率的超聲激發(fā)聲敏劑而殺死腫瘤細(xì)胞。超聲波有很強(qiáng)的穿透能力,并且聚集于腫瘤組織的區(qū)域內(nèi)激活聲敏藥物,繼而產(chǎn)生一系列的生物化學(xué)反應(yīng)(如空化效應(yīng)及產(chǎn)生單態(tài)氧)使腫瘤細(xì)胞發(fā)生不可逆的損傷[2]。由于超聲波較紅光選擇性聚焦且穿透力強(qiáng),并且對(duì)周圍正常組織損傷較小,因

4、此,聲動(dòng)力療法的抗腫瘤效應(yīng)具有良好的應(yīng)用前景。鑒于多數(shù)光敏劑同時(shí)具聲動(dòng)力作用,目前聲動(dòng)力多采用光敏劑做聲敏劑[3],但目前存在兩個(gè)問題:一是光敏劑腫瘤特異性聚集低、正常組織清除慢及光毒副作用高等缺點(diǎn),限制了SDT 被批準(zhǔn)用于臨床,因此需發(fā)展新型聲敏劑；二是SDT如何與其他主要治療手段聯(lián)合進(jìn)一步提高療效。
　　 光敏劑二氫卟吩e6具有腫瘤特異性聚集性高,排泄快等優(yōu)點(diǎn),鑒于多數(shù)光敏劑同時(shí)具聲動(dòng)力作用,我們用其作為聲敏劑,首先觀察其介

5、導(dǎo)的聲動(dòng)力效應(yīng)對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231生長的影響。
　　 近年來,光動(dòng)力療法聯(lián)合化療藥物治療惡性腫瘤頗受重視,MatthewPeterson、Canti G 及 Kirveliene 等人分別采用不同的光敏劑介導(dǎo)的PDT聯(lián)合阿霉素治療惡性腫瘤,發(fā)現(xiàn)阿霉素對(duì)PDT的抗瘤作用有增敏效應(yīng)[4,5],并且該效應(yīng)具有時(shí)序性[5,6]。本研究的第二個(gè)目的是觀測(cè)阿霉素對(duì)以二氫卟吩e6為聲敏劑的聲動(dòng)力療法抑制乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-23

6、1生長的作用,旨在探討阿霉素對(duì)二氫卟吩e6聲動(dòng)力療法是否具有增敏作用。
　　 第一部分 二氫卟吩e6介導(dǎo)的聲動(dòng)力效應(yīng)對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞以及PMNC細(xì)胞生長的影響
　　 超聲與二氫卟吩e6單獨(dú)及聯(lián)合處理 MDA-MB-231 細(xì)胞和正常人外周血單核細(xì)胞 PMNC,45min 后采用噻唑藍(lán)(MTT)比色法檢測(cè)細(xì)胞生長,熒光倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用 SPSS13.0軟件進(jìn)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差

7、(x±s)表示,相關(guān)多組采用 One-way ANOVA 檢驗(yàn),各組間采用 LSD 或 Tamhane 檢驗(yàn),P<0.05 判定為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果顯示:
　　 1.1.0MHz頻率超聲強(qiáng)度 1.0～2.0W/cm2 作用60s呈強(qiáng)度依賴性抑制MDA-MB-231 細(xì)胞和PMNC細(xì)胞生長,其抑制50％PMNC和MDA-MB-231細(xì)胞生長的超聲強(qiáng)度分別為1.23 W/cm2和1.25 W/cm2,表明相應(yīng)強(qiáng)度的超聲對(duì)乳腺癌細(xì)

8、胞MDA-MB-231和正常人體單核細(xì)胞PMNC殺傷效應(yīng)相似。0.1mg/ml～1.6mg/ml二氫卟吩e6濃度依賴性抑制MDA-MB-231 細(xì)胞和PMNC細(xì)胞生長,其抑制MDA-MB-231 細(xì)胞和PMNC細(xì)胞生長的IC50值分別為0.38mg/ml和0.77mg/ml,表明MDA-MB-231細(xì)胞對(duì)二氫卟吩e6的作用更敏感。
　　 2.0.5W/cm2×60s× 1.0MHz 超聲和0.05mg/ml～0.2mg/ml 二

9、氫卟吩 e6 無抑制PMNC 細(xì)胞生長作用(超聲組以 Welch 檢驗(yàn)得到 F=141.792,P=0.000,超聲0.5W/cm2 組的P=1.000,與對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；二氫卟吩 e6 組F=64.468,P=0.000,經(jīng)由 LSD 法檢測(cè)組內(nèi)差異,0.05mg/ml～0.2mg/ml與對(duì)照相比,P 值分別為0.951、0.952、0.915,均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異),兩者聯(lián)合顯著抑制MDA-MB-231細(xì)胞生長(F=66.099,

10、P=0.000,經(jīng)由LSD法檢測(cè)組內(nèi)差異,超聲聯(lián)合0.05mg/ml～0.2mg/ml二氫卟吩e6各組的P值均為0.000,與對(duì)照組相比有顯著性差異)。
　　 3.細(xì)胞形態(tài)觀察顯示,與單純超聲(0.5W/cm2×60s×1.0 MHz)和chlorin-e6(O.2mg/mL)相比,超聲聯(lián)合 chlorin-e6 組 MDA-MB-231 細(xì)胞死亡數(shù)目增加,損傷程度明顯加重,完整細(xì)胞的比例明顯減少,可以看到更多的細(xì)胞碎片。

11、>　　 第二部分 二氫卟吩e6介導(dǎo)的聲動(dòng)力聯(lián)合阿霉素對(duì)乳腺癌細(xì)MDA-MB-231的體外殺傷
　　 超聲、二氫卟吩e6、SDT 作用同第一部分實(shí)驗(yàn),在此基礎(chǔ)上,使用阿霉素以及 SDT 聯(lián)合阿霉素處理MDA-MB-231 細(xì)胞,45min 后采用噻唑藍(lán)(MTT)比色法檢測(cè)細(xì)胞生長。采用 SPSS13.0 軟件,實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,相關(guān)多組采用 One-way ANOVA 檢驗(yàn),各組間采用LSD或Tamhane

12、檢驗(yàn)P<0.05 判定為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果顯示:
　　 1.1.0MHz 頻率、強(qiáng)度為0.5～2.0W/cm2的超聲作用 60s 以及0.05mg/ml～1.6mg/ml二氫卟吩e6對(duì)MDA-MB-231 細(xì)胞生長的影響結(jié)果同第一部分實(shí)驗(yàn)。
　　 2.0.5W/cm2×60s×1.0MHz 超聲和0.05mg/ml～0.2mg/ml 二氫卟吩e6兩者聯(lián)合的SDT作用結(jié)果見第一部分實(shí)驗(yàn)。
　　 3.0.1μg/

13、ml～0.4μg/ml的阿霉素?zé)o抑制 MDA-MB-231 細(xì)胞生長作用
　　 4.0.5W/cm2×60s×1.0MHz 超聲和0.1mg/ml二氫卟吩e6聲動(dòng)力治療聯(lián)合0.1μg/ml～0.4μg/ml的阿霉素呈阿霉素濃度依賴性抑制 MDA-MB-231 細(xì)胞生長,且相比聲動(dòng)力以及阿霉素組均有更顯著抑制MDA-MB-231 細(xì)胞生長(經(jīng)由Welch 檢驗(yàn)得到 F=141.431,.P=0.000,經(jīng)由 Tamhane 法組內(nèi)

14、檢驗(yàn)得出:聯(lián)合治療組與單獨(dú)聲動(dòng)力組和單獨(dú)阿霉素組相比,除阿霉素 0.1μg/ml 和0.2μg/ml 聯(lián)合聲動(dòng)力組與單獨(dú)聲動(dòng)力組比較,P 值為 1.000 外,其余 P<0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)；不同的聯(lián)合時(shí)序可產(chǎn)生不同的抑制效應(yīng),聲動(dòng)力作用后加入阿霉素組(SDT+阿霉素)比先加入阿霉素后進(jìn)行聲動(dòng)力組(阿霉素+SDT)更能顯著抑制乳腺癌細(xì)胞的生長(經(jīng)由Welch檢驗(yàn)得到F=141.431,P=0.000,經(jīng)由Tamhane法組內(nèi)檢

15、驗(yàn)得出:阿霉素濃度分別為0.1μg/ml、0.2μg/ml、0.4μg/ml時(shí),SDT+相應(yīng)濃度阿霉素組與相應(yīng)濃度阿霉素+SDT組相比,P值分別為0.000、0.038、0.006,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義)。
　　 結(jié)論:二氫卟吩e6介導(dǎo)的聲動(dòng)力能夠特異性抑制乳腺痛細(xì)胞MDA-MB-231 生長,有望成為一個(gè)新型聲敏劑用于聲動(dòng)力治療乳腺癌。二氫卟吩e6聲動(dòng)力聯(lián)合ADM 顯著抑制乳腺痛細(xì)胞 MDA-MB-231 生長,且聲動(dòng)力作用后用