微粒給藥系統(tǒng)的理化性質與靶向性研究.pdf

1、本論文在研究硬脂酸固體脂質納米粒給藥系統(tǒng)基礎上，以多糖的細胞核趨向性理論為核心，設計以硬脂酸化學嫁接低分子量殼聚糖(殼寡糖)，制備具有糖脂類化學結構的新型納米載體材料—殼寡糖-硬脂酸嫁接物。具有兩親性結構的糖脂材料，可在水性介質中自聚集形成嫁接物膠團。嫁接物膠團的陽離子特性，適用于包封蛋白類藥物的控制釋放研究。嫁接物膠團內核的疏水特性，可包封親脂性的抗腫瘤藥物，通過嫁接物膠團的表面修飾，實現(xiàn)藥物的控制釋放。以嫁接物膠團的亞細胞器趨向性理

2、論研究為基礎，指導嫁接物載藥膠團的抗腫瘤活性研究，探索逆轉耐藥腫瘤細胞耐藥性的可能性。 以丙酸倍氯米松為模型藥物，硬脂酸為固體脂質材料，油酸為液體脂質材料，溶劑擴散法制備丙酸倍氯米松硬脂酸固體脂質納米粒和納米結構脂質載體?？疾煲后w脂質的含量對納米粒粒徑、表面電位、形態(tài)、表面性質、晶型結構以及載藥、釋藥性能的影響。當油酸含量低于15％時，納米粒粒徑較大，形態(tài)較為不規(guī)則；當油酸含量達到30％時，粒徑顯著減小，為較為均一的圓球型。增加

3、納米結構脂質載體中油酸比例，有助于提高藥物的承載量和包封率，該結果與納米粒骨架中無定型等不規(guī)則晶型比例的增加有關。以溶劑擴散法70℃制備得到的納米結構脂質載體，為一種液體脂質較多分布于納米粒表層及淺表層骨架部位的核一殼結構，藥物體外釋放呈兩相模式，包括初始的藥物快速釋放和后期的藥物緩慢釋放的雙重功能，藥物釋放的初期和后期均符合Higuchi方程。 以碳二亞胺為交聯(lián)偶合劑制備殼寡糖．硬脂酸嫁接物。核磁共振光譜法確證嫁接物化學結構；

4、三硝基苯磺酸法測定嫁接物氨基取代度，芘熒光法測定嫁接物在水中的臨界聚集濃度。以微粒粒度及表面電位分析儀分別測定嫁接物膠團粒徑與表面電位，原子力顯微鏡測定嫁接物膠團空間結構。氨基取代度15.4％的嫁接物，在水中的臨界聚集濃度為0.035 mg.mL-1。制備得到的嫁接物膠團，其粒徑為70.6 am，電位為46.4±0.1 mV。用原子力顯微鏡觀察，該膠團呈球形，大小均勻。 利用殼寡糖一硬脂酸嫁接物的陽離子特性，以小牛血清白蛋白為模

5、型藥物，通過嫁接物與蛋白藥物之間的離子相互作用，制備殼寡糖．硬脂酸嫁接物膠團/蛋白復合納米粒。用透射電鏡表征納米粒形態(tài)，以微粒粒度與表面電位測定儀測定嫁接物膠團/蛋白復合納米粒的粒徑和表面電位。所形成的嫁接物膠團/蛋白復合納米粒，粒徑均大于100 nm，為多個嫁接物膠團與蛋白藥物密接后的復合結構。嫁接物膠團/蛋白復合納米粒粒徑，隨著分散介質pH值的下降而減小，而表面電位與包封率隨分散介質pH值的下降而增加。載藥納米粒的體外釋放特性符合H

6、iguchi線性方程，隨著釋放介質pH值的下降，嫁接物的質子化程度增強，藥物與嫁接物的結合能力增強，從而導致藥物從復合納米粒中的釋放速率減緩。體外穩(wěn)定性研究表明，該復合物納米粒常溫下放置具有良好的穩(wěn)定性。以戊二醛為交聯(lián)固化劑，進行殼寡糖．硬脂酸嫁接物膠團表面修飾，考察戊二醛濃度對固化納米粒粒徑和表面電位的影響。分別以喜樹堿和阿霉素為模型藥物，透析法制備嫁接物載藥膠團。以微粒粒度與表面電位儀，測定嫁接物膠團載藥前后及固化前后的粒徑和表面電

7、位。用超濾離心法分離，高效液相色譜法或熒光分光光度法測定載藥膠團的藥物包封率，進行藥物體外釋放研究。嫁接物載藥膠團，經(jīng)戊二醛表面固化修飾，可減小微粒粒徑，增加藥物包封率，延緩藥物的釋放速度。隨著嫁接物氨基取代度的增加，藥物的包封率呈同步增加趨勢，藥物的釋放速率總體上出現(xiàn)減緩趨勢。選擇合適的嫁接物氨基取代度和表面固化修飾條件，可實現(xiàn)藥物的控制釋放。 以異硫氰基熒光素標記嫁接物膠團載體，以殼寡糖納米粒和硬脂酸納米粒為對照，考察載體的

8、理化性質、細胞攝取和細胞核轉運性能。研究發(fā)現(xiàn)殼寡糖納米粒的細胞攝取能力最弱，硬脂酸納米粒不具備細胞核轉運能力，而嫁接物膠團與細胞孵育2h后，發(fā)現(xiàn)細胞內可以觀察到很強的熒光。其中又以細胞核熒光強度最高，且具有能量和濃度依賴性。膜通透后細胞與嫁接物膠團在37℃共同孵育后，熒光標記膠團主要聚集細胞核。經(jīng)核定位信號肽入核途徑抑制劑Ⅳ-乙基順丁稀二酰亞胺處理，共孵育后的嫁接物膠團仍然能夠進入細胞核，證實嫁接物膠團入核不是核定位信號肽入核途徑。經(jīng)糖

9、蛋白入核途徑抑制劑小麥胚芽凝集素處理，共孵育后的嫁接物膠團不能進入細胞核，證實嫁接物膠團入核是糖蛋白入核途徑。低溫4℃條件下共孵育，發(fā)現(xiàn)嫁接物膠團不能進入細胞核，證實嫁接物膠團入核需要消耗能量。 采用碳二亞胺偶合法，進一步合成殼寡糖．硬脂酸聚合物的葉酸化學修飾聚合物。以抗腫瘤藥物絲裂霉素c(mitomycin，MMC)為模型藥物，考察殼寡糖-硬脂酸嫁接物載藥膠團的理化性質。以人II型肺癌細胞A549為模型細胞，MTT法測定載藥膠

10、團的細胞毒性，評價嫁接物膠團載體濃度和孵育時間對藥物抗腫瘤藥效的影響。發(fā)現(xiàn)該聚合物膠團可以介導藥物進入細胞，顯著增強藥物的抗腫瘤活性。經(jīng)葉酸修飾的聚合物膠團，可增加藥物包封率，提高藥物的抗腫瘤活性。以抗腫瘤藥物阿霉素(adriamycin，Adr)為模型藥物，考察殼寡糖-硬脂酸嫁接物載藥膠團的理化性質。嫁接物膠團的藥物包封率在50％以上，12h內釋藥基本完全。MTT法測定阿霉素對耐阿霉素乳腺癌細胞MCF-7/Adr及其敏感乳腺癌細胞MC