鏈霉菌4209-23抗腫瘤活性成分及微生物來源IL-4受體拮抗劑的研究.pdf

1、自從二十世紀(jì)五十年代初人們開始從微生物產(chǎn)物中篩選抗腫瘤物質(zhì)以來，微生物來源的抗腫瘤藥物研究發(fā)展迅速，越來越多的微生物提取物及次級代謝產(chǎn)物被發(fā)現(xiàn)具有抗腫瘤作用且作用機(jī)制多樣。精原細(xì)胞法作為天然來源抗腫瘤藥物的初篩方法，對于檢測天然來源的抗腫瘤活性物質(zhì)顯示了較高的敏感性與相關(guān)性<['1]>，通過該模型已陸續(xù)篩選到一系列抗腫瘤化合物。 本文對通過精原細(xì)胞法篩選到的鏈霉菌4209-23(Streptomyces 4209-23)進(jìn)行了菌

2、種分類及發(fā)酵液化學(xué)成分的研究。 通過對產(chǎn)生菌形態(tài)特征，培養(yǎng)特征，化學(xué)分類，分子生物學(xué)分類的分析可知，4209.23菌株與生白鏈霉菌的16SrDNA序列同源性最接近為95.36％，可認(rèn)為是一新種。 從4209-23發(fā)酵液的丙酮提取物脂溶性部分中，經(jīng)硅膠粗分得到灰黑色粗品，再利用ODS中壓柱，冷凍干燥等手段，分離純化得到一個(gè)灰黑色固體物質(zhì)。經(jīng)過uv，IR，MS，<'1>H-NMR，<'13>C-NMR，HMQC以及HMBC等

3、波譜分析，確定了該化合物(4209-23A)的結(jié)構(gòu)，為鏈黑菌素(Streptonigrin)?；瘜W(xué)名為β-D-Glucopyranuronic acid， methyl ester, 2,3,4-triacetate1-[[4-(haydroxymethyl)-2-nitrophenyl]carbamate]。 鏈黑菌素具有顯著的抗革蘭氏陽性和陰性菌的活性，同時(shí)對多種腫瘤細(xì)胞具有抑制作用。 細(xì)胞因子是細(xì)胞內(nèi)存在或分泌的有

4、生物活性的大分子，大多為多肽類物質(zhì)，調(diào)節(jié)或修飾炎癥或免疫反應(yīng)中的細(xì)胞應(yīng)答，與機(jī)體的生理，病理過程休戚相關(guān)。白細(xì)胞介素-4(Interleukin 4，IL-4)作為一種多功能細(xì)胞因子在免疫反應(yīng)中起重要作用。由于IL-4能夠調(diào)控IgE合成，因此在哮喘等變態(tài)性炎癥反應(yīng)中具有關(guān)鍵作用。IL-4通過結(jié)合細(xì)胞表面的白細(xì)胞介素-4受體(IL-4 Receptor,IL-4R)發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)。IL-4R是異二聚體復(fù)合物，通常由IL-4Rα鏈和γC(C

5、ommonγ)鏈組成。IL-4R復(fù)合物中IL-4Rα鏈對結(jié)合IL-4起主導(dǎo)作用。 本文采用生物工程室構(gòu)建的IL-4受體拮抗劑篩選模型，對約700個(gè)化合物和微生物發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行篩選，并對其中的兩株陽性菌株4849和4318代謝產(chǎn)物進(jìn)行了分離純化，另外還對4849進(jìn)行了菌種分類的研究。 根據(jù)形態(tài)特征，細(xì)胞壁組分分析和16S rDNA序列分析，菌株4849屬于鏈霉菌屬；其培養(yǎng)特征，生理生化特征和16S rDNA序列均與硫藤黃鏈霉

6、菌極為相似。故將菌株4849定名為硫藤黃鏈霉菌(Streptomyces thioluteus)。 采用多種柱層析方法，對4849和4318的發(fā)酵液進(jìn)行提取分離，得到化合物4849A-G和4318A，其中4849C-G和4318A具有一定的拮抗活性。經(jīng)過UV，IR，MS，<'1>H-NMR，<'13>C-NMR，HMQC以及HMBC等波譜分析，確定了這些化合物的結(jié)構(gòu)。其中4849F為一新化合物，結(jié)構(gòu)如下抑菌試驗(yàn)顯示，4849F對