改性魔芋葡甘露聚糖對(duì)齊口裂腹魚免疫及相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、為研究低分子量氧化魔芋葡甘露聚糖(LOKGM)及氧化魔芋葡甘露聚糖硫酸酯(OKGMS)對(duì)齊口裂腹魚生長(zhǎng)、臟器指數(shù)、血清免疫及抗氧化指標(biāo)及免疫相關(guān)基因表達(dá)的影響，為OKGMS及LOKGM在功能性食品中的應(yīng)用提供理論依據(jù)，選取平均質(zhì)量為81.00±2.48g的健康齊口裂腹魚420尾，隨機(jī)分為7組，每組3個(gè)重復(fù)?；A(chǔ)組飼喂基礎(chǔ)飼料，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)飼料中各組分別添加0.4％ LOKGM、0.8％ LOKGM、1.6％ LOKGM及0.4％ OKG

2、MS、0.8％ OKGMS、1.6％ OKGMS。飼喂60 d后，測(cè)定特定生長(zhǎng)率、肥滿度、中腎指數(shù)、頭腎指數(shù)、肝體比、脾體指數(shù)、腸體指數(shù)和腸長(zhǎng)指數(shù);按照試劑盒說明書測(cè)定溶菌酶(LZM)、補(bǔ)體旁路途徑溶血活性(ACH50)、超氧化物歧化酶(SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性、免疫球蛋白M(IgM)及丙二醛(MDA)含量;熒光定量PCR測(cè)定頭腎、中腎、腸道、肝臟和脾臟中Toll樣受體22(tlr22)、髓樣分化因子88（myd

3、88）、干擾素調(diào)節(jié)因子7(irf7)、Ⅰ型干擾素（Ⅰ-ifn）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（tgf-1）基因表達(dá)水平。研究結(jié)果如下:
　　1.在生長(zhǎng)及臟器指數(shù)方面，日糧添加不同劑量OKGMS與LOKGM對(duì)齊口裂腹魚特定生長(zhǎng)率、肥滿度、中腎指數(shù)、頭腎指數(shù)、肝臟指數(shù)、腸體指數(shù)、腸長(zhǎng)指數(shù)均無(wú)顯著影響(p＞0.05)，OKGMS1.6組顯著提高齊口裂腹魚脾體指數(shù)(p＜0.05)。
　　2.在血清抗氧化指標(biāo)方面，OKGMS與LOKGM均能提高血

4、清SOD活性，且OKGMS各劑量組均達(dá)到顯著水平;與對(duì)照組相比，OKGMS0.4、 OKGMS0.8、LOKGM0.4、LOKGM0.8組均能顯著降低齊口裂腹魚血清MDA的含量(p＜0.05)，說明OKGMS與LOKGM對(duì)血清MDA的含量有一定的影響;LOKGM0.8、LOKGM1.6組血清中GSH-PX含量顯著高子對(duì)照組(p＜0.05)，其他組均無(wú)顯著影響。
　　3.在血清免疫指標(biāo)方面，與對(duì)照組相比，OKGMS1.6組能顯著提高

5、齊口裂腹魚血清IgM活性與ACH50含量(p＜0.05)，其他劑量組均可提高血清IgM含量，但未達(dá)到顯著水平;OKGMS1.6與OKGM0.8組能顯著提高齊口裂腹魚血清中LSZ含量(p＜0.05)。
　　4.在引物設(shè)計(jì)及驗(yàn)證方面，參照NCBI鯉魚、斑馬魚、草魚等鯉科魚免疫相關(guān)基因序列設(shè)計(jì)引物，成功克隆得到tlr22、myd88、irf7、Ⅰ-ifn和tgf-β1的基因片段，分別為174bp、125bp、142bp、192bp和19

6、0bp，分別編碼58、41、47、64和63個(gè)氨基酸。從氨基酸序列比對(duì)結(jié)果及進(jìn)化樹分析來看，tlr22、myd88、irf7、Ⅰ-ifn與tgf-β1基因與鯉科魚氨基酸序列相似度較高，親緣關(guān)系也較近。
　　5.在免疫相關(guān)基因表達(dá)方面，OKGMS能顯著提高頭腎、中腎、腸道、肝臟中tlr22基因相對(duì)表達(dá)量(p＜0.05)，對(duì)脾臟tlr22表達(dá)量無(wú)顯著影響(p＞0.05)，LOKGM能顯著上調(diào)對(duì)頭腎、中腎、腸道、肝臟、脾臟各組織中tlr

7、22基因相對(duì)表達(dá)量(p＜0.05);OKGMS能顯著上調(diào)中腎、腸道、肝臟中myd88基因相對(duì)表達(dá)量(p＜0.05)，對(duì)頭腎和脾臟myd88基因相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著影響(p＞0.05)，LOKGM能顯著提高頭腎、腸道中myd88基因相對(duì)表達(dá)量(p＜0.05);對(duì)中腎、肝臟、脾臟中myd88基因相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著影響(p＞0.05); OKGMS顯著提高齊口裂腹魚中腎、肝臟、脾臟中irf7基因相對(duì)表達(dá)量影響顯著(p＜0.05)對(duì)頭腎和腸道中irf

8、7基因相對(duì)表達(dá)量影響不顯著(p＞0.05)，LOKGM能顯著提高齊口裂腹魚腸道、肝臟、脾臟中irf7基因相對(duì)表達(dá)量(p＜0.05)，對(duì)頭腎和中腎中irf7基因相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著影響(p＞0.05); OKGMS對(duì)齊口裂腹魚頭腎Ⅰ-ifn基因相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著影響(p＞0.05)，顯著上調(diào)中腎、腸道、肝臟、脾臟中Ⅰ-ifn基因相對(duì)表達(dá)量(p＜0.05)，LOKGM能顯著提高齊口裂腹魚中腎、腸道、脾臟中Ⅰ-ifn基因相對(duì)表達(dá)量(p＜0，05)，

9、對(duì)頭腎和肝臟中-ifn基因相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著影響(p＞0.05); OKGMS顯著下調(diào)頭腎、腸道、肝臟中tgf-β1基因相對(duì)表達(dá)量(p＜0.05)，對(duì)中腎、脾臟中tgf-β1基因相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著影響(p＞0.05)，LOKGM顯著下調(diào)齊口裂腹魚頭腎、中腎、肝臟中tgf-β1基因相對(duì)表達(dá)量(p＜0.05)，對(duì)腸道、脾臟中tgf-β1基因相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著影響(p＞0.05)。
　　因此，我們得出如下結(jié)論:
　　日糧中添加一定劑量O

10、KGMS及LOKGM對(duì)齊口裂腹魚生長(zhǎng)及臟器指數(shù)影響較小，僅OKGMS1.6組顯著提高齊口裂腹魚脾體指數(shù);OKGMS對(duì)齊口裂腹魚血清SOD活性影響顯著;與對(duì)照組相比，OKGMS及LOKGM低劑量和中劑量均能顯著降低齊口裂腹魚血清MDA的含量;LOKGM0.8、 LOKGM1.6對(duì)血清中GSH-Px含量影響顯著;日糧中添加OKGMS和LOKGM會(huì)上調(diào)齊口裂腹魚tlr22、myd88、irf7、Ⅰ-ifn基因在頭腎、中腎、腸道、肝臟和脾臟中的