齊口裂腹魚CB1和SPX基因克隆與組織表達以及營養(yǎng)狀態(tài)對其表達影響.pdf

1、本試驗為研究齊口裂腹魚CB1和SPX對攝食調(diào)控的作用，主要通過RACE等技術獲得了CB1和SPX序列，以及利用熒光定量技術等檢測齊口裂腹魚CB1和SPX mRNA在組織中表達以及營養(yǎng)狀態(tài)（餐前餐后、禁食與復投喂）對其表達的影響。
　　結果顯示，通過分子克隆技術獲得了齊口裂腹魚的部分CB1序列和全長SPX序列，長度分別是1234 bp和1330 bp。序列分析發(fā)現(xiàn)，齊口裂腹魚CB1和SPX基因在魚類上高度保守。結構預測顯示，齊口裂腹

2、魚CB1跨膜結構與斑馬魚在序列上的位置高度相似;SPX具有31個氨基酸組成的信號肽以及二元堿基剪切位點(RR and GRR)包含的14個氨基酸成熟肽。
　　CB1和SPX在組織中廣泛分布，并在前腦中表達量最高。CB1在垂體、心臟、皮膚等組織中表達也豐富，而在性腺中表達最低;SPX在垂體、前腸、中腸等組織中表達也較高，而在肌肉中幾乎不表達。
　　餐前餐后試驗分別檢測了7個組齊口裂腹魚在-3 h，-1h，0h（投喂點），+1h

3、和+3 h共5個時間點齊口裂腹魚前腦中CB1和SPX的mRNA變化情況。結果表明，未進食組的齊口裂腹魚前腦中CB1 mRNA在餐后后的+3h出現(xiàn)顯著升高(P＜0.01）。投喂組CB1 mRNA比饑餓組在+1h和+3h下降顯著(P＜0.01）;與之相反，未進食組齊口裂腹魚SPX mRNA表達水平在餐后+1h和+3h顯著降低(P＜0.01)，與未進食組比較，SPX表達在餐后顯著升高。
　　禁食試驗持續(xù)9天共9個組，分別為5個禁食組和4

4、個正常投喂組，其中2個禁食組在第7天開始復投喂，并分別在第3、5、7和9天進行采樣，檢測齊口裂腹魚前腦中CB1和SPX的mRNA變化情況。結果顯示:禁食組齊口裂腹魚在第3、5和7天時前腦中CB1 mRNA的表達較投喂組顯著升高(P＜0.01);相反地，SPX mRNA水平呈現(xiàn)顯著下降(P＜0.01)。在第7天復投喂2小時后，CB1 mRNA表達水平恢復正常;而SPX較正常攝食組顯著升高，繼續(xù)投喂至第9天，SPX恢復到正常投喂組水平。