短暫腦缺血對(duì)大鼠皮層軸突形態(tài)影響的研究.pdf

1、缺血性腦卒中是老年人常見(jiàn)的腦血管疾病,因其發(fā)病率高、致殘率高,病理生理?yè)p傷機(jī)制復(fù)雜而一直是醫(yī)學(xué)研究的熱點(diǎn)。以往認(rèn)為腦缺血特別是一過(guò)性腦缺血與阿爾茨海默病(AD)是各自獨(dú)立的疾?。荒X缺血引起的血管性癡呆(VD)與AD也在臨床上被區(qū)分為不一樣的癡呆類(lèi)型,但近年卻發(fā)現(xiàn)AD與腦血管病變有直接的關(guān)系:如可導(dǎo)致腦缺血的危險(xiǎn)因素也可使AD的患病率升高,而同時(shí)存在腦缺血梗死病史的AD患者發(fā)生的認(rèn)知功能障礙也會(huì)較單純的AD患者更加嚴(yán)重和進(jìn)展快速。一些動(dòng)物

2、實(shí)驗(yàn)研究中也發(fā)現(xiàn)了局部腦缺血-再灌注的動(dòng)物模型可以表現(xiàn)出部分AD的病理特征。AD典型病理特征是腦組織內(nèi)p淀粉樣蛋白(β-amyloid)過(guò)量產(chǎn)生并聚集引起的老年斑塊(Senile plaque,SP)和tau蛋白過(guò)度磷酸化引起的神經(jīng)元纖維纏結(jié)(Neurofibrillary tangle,NFTs)以及神經(jīng)元丟失,突觸減少等[1]。目前AD的發(fā)病機(jī)制仍然沒(méi)有研究清楚,但研究腦缺血如何影響AD的產(chǎn)生和發(fā)展,對(duì)于探索AD的發(fā)病機(jī)制、病理生理

3、改變以及早期預(yù)防和治療都具有重要意義。近年來(lái),采用死亡后人腦示蹤技術(shù)在AD腦中觀察到了軸突和膨體腫脹及軸突漏的現(xiàn)象,因此,我們?cè)诰植磕X缺血再灌注模型的基礎(chǔ)上,使用神經(jīng)示蹤和免疫組化的方法觀察腦缺血可否導(dǎo)致類(lèi)似AD腦組織中的軸突病變以及腦缺血后軸突病變的長(zhǎng)期改變情況,包括可能的恢復(fù)情況；同時(shí)觀察腦缺血使Aβ42與磷酸化tau這兩個(gè)AD特征性蛋白的改變。我們的研究將為探討腦缺血與AD關(guān)系的病理機(jī)制以及防治AD提供重要的研究資料。
　　

4、 目的:1.觀測(cè)大鼠短暫性局部腦缺血30min后皮層神經(jīng)元軸突和軸突膨體是否發(fā)生形態(tài)學(xué)的改變。2.嘗試建立一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)觀察到的形態(tài)學(xué)改變進(jìn)行評(píng)定和分級(jí),作為推測(cè)軸突轉(zhuǎn)運(yùn)障礙程度的指標(biāo)判斷在試驗(yàn)期內(nèi)其形態(tài)學(xué)改變是否恢復(fù)。3.檢測(cè)短暫性局部腦缺血30min對(duì)大鼠腦內(nèi)Aβ-42和磷酸化tau這兩個(gè)AD腦特征性蛋白表達(dá)和分布的影響
　　 方法：1.大鼠建立MCAO大腦中動(dòng)脈短暫缺血再灌注模型后,在大鼠缺血腦區(qū)注射神經(jīng)示蹤劑BDA,同時(shí),

5、在MCAO后存活的不同時(shí)間點(diǎn)觀測(cè)示蹤劑所顯示的軸突及膨體形態(tài)學(xué)改變,2.依據(jù)軸突和軸突膨體的直徑增加程度進(jìn)行半定量分級(jí)并作為推測(cè)其軸突轉(zhuǎn)運(yùn)障礙嚴(yán)重程度的一個(gè)指標(biāo)。3.使用免疫組化雙標(biāo)記方法觀察短暫性腦缺血30rain后再灌注對(duì)大鼠皮層Aβ42、磷酸化tau蛋白表達(dá)分布的改變特點(diǎn)及其與軸突轉(zhuǎn)運(yùn)障礙的發(fā)生的位置關(guān)系。
　　 結(jié)果：1.大鼠MCA阻斷30min后恢復(fù)灌注,24小時(shí)后即可觀察到BDA示蹤劑顯示缺血側(cè)皮層神經(jīng)元的軸突和軸突

6、膨體發(fā)生明顯的腫脹甚至破裂泄漏。2.按照本實(shí)驗(yàn)室的前期建立的標(biāo)準(zhǔn)將軸突改變進(jìn)行分級(jí)并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,顯示MCAO組較假手術(shù)組有顯著性差異。MCAO后1周,2周,4周均觀測(cè)到軸突和膨體相似的改變,但各組之間的差異并不具有顯著性3.Aβ42在缺血側(cè)也有明顯的表達(dá)增加,且在1周之后逐漸降低；同時(shí),磷酸化tau在MCAO后也同樣升高,表明短暫性腦缺血再灌注引起了AD特征性蛋白的表達(dá)水平改變。
　　 結(jié)論：1.短暫性腦缺血可以導(dǎo)致軸突和軸