腦缺血耐受及骨髓動(dòng)員對腦缺血的影響.pdf

1、目的：探討小鼠腦缺血耐受預(yù)處理不同時(shí)間劑量以及誘導(dǎo)腦缺血耐受產(chǎn)生的不同時(shí)間窗,確立最佳耐受時(shí)間劑量和誘導(dǎo)時(shí)間窗;觀察毛冬青總黃酮等中藥成分對小鼠腦缺血耐受的影響,篩選具有增強(qiáng)腦缺血耐受作用的中藥成分;探討毛冬青總黃酮提高骨髓干細(xì)胞動(dòng)員對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。
　　方法：1、采用兩次結(jié)扎小鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈方法造腦缺血耐受模型,通過觀察不同預(yù)處理時(shí)間劑量下小鼠腦組織形態(tài)的變化,確定小鼠腦缺血耐受最佳時(shí)間劑量。
　　2、采

2、用兩次結(jié)扎小鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈方法造腦缺血耐受模型,通過觀察不同預(yù)處理誘導(dǎo)時(shí)間窗下小鼠腦組織形態(tài)的變化,確立小鼠腦缺血耐受最佳誘導(dǎo)時(shí)間窗。
　　3、采用兩次結(jié)扎小鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈方法造腦缺血耐受模型,通過觀察毛冬青總黃酮等中藥成分在最佳耐受時(shí)間劑量、誘導(dǎo)時(shí)間窗下對小鼠腦組織形態(tài)的變化,篩選出具有增強(qiáng)腦缺血耐受作用的中藥成分。
　　4、采用稍加改良線栓法制作大鼠腦缺血再灌注模型,應(yīng)用粒細(xì)胞集落刺激因子(G-GSF)刺激自體骨髓干細(xì)胞

3、分裂增殖,并用5-溴脫氧尿核苷(Brdu)標(biāo)記。觀察大鼠腦組織HE染色、尼氏染色,免疫組化檢測CD34和Brdu陽性細(xì)胞,免疫組化法檢測Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：1、對小鼠腦缺血耐受不同時(shí)間劑量的影響預(yù)缺血10min+再次缺血30min組時(shí)間劑量較其他實(shí)驗(yàn)組能顯著提高腦缺血時(shí)腦神經(jīng)細(xì)胞的耐受作用(P<0.01)。
　　2、對誘導(dǎo)小鼠腦缺血耐受產(chǎn)生的不同時(shí)間窗的影響120h組的誘導(dǎo)時(shí)間窗較其他實(shí)驗(yàn)組能顯著提高腦缺

4、血時(shí)腦神經(jīng)細(xì)胞的耐受作用(P<0.01)。
　　3、不同中藥成分對小鼠腦缺血耐受的影響與模型組相比,養(yǎng)血清腦顆粒組、毛冬青總黃酮小劑量組、柿葉黃酮大、中劑量組、生姜揮發(fā)油大、中劑量組、川芎嗪注射液大劑量組、燈盞花素注射液大劑量組能顯著增強(qiáng)腦缺血耐受(P<0.01)。
　　4、動(dòng)員自體骨髓干細(xì)胞對大鼠腦缺血再灌注損傷的影響與模型組(非動(dòng)員組)相比,毛冬青總黃酮大、中劑量組、動(dòng)員組對腦缺血時(shí)腦組織神經(jīng)細(xì)胞的損傷的保護(hù)作用顯著(P

5、<0.01),毛冬青總黃酮小劑量對腦缺血時(shí)腦神經(jīng)細(xì)胞的損傷的保護(hù)作用顯著或明顯(P<0.01或P<0.05);毛冬青總黃酮大劑量組Bax蛋白表達(dá)有顯著的統(tǒng)計(jì)意義(P<0.01),動(dòng)員組Bax蛋白表達(dá)有明顯的統(tǒng)計(jì)意義(P<0.05);動(dòng)員組、毛冬青總黃酮大劑量組Bcl-2蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.05);毛冬青總黃酮大劑量組CD34陽性細(xì)胞表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.05);毛冬青總黃酮大、中、小劑量組Brdu陽性細(xì)胞表達(dá)顯著增強(qiáng)(P<0.01

6、),動(dòng)員組Brdu陽性細(xì)胞表達(dá)明顯增強(qiáng)(P<0.05)。
　　結(jié)論：通過對不同時(shí)間劑量、不同誘導(dǎo)時(shí)間窗下小鼠腦缺血耐受的研究,以10min腦缺血作為預(yù)處理,可對間隔5天后30min腦缺血引起的腦神經(jīng)細(xì)胞損傷產(chǎn)生一定的保護(hù)作用,因此預(yù)缺血10min+再次缺血30min、120h誘導(dǎo)時(shí)間窗為比較合適的腦缺血耐受時(shí)間;柿葉黃酮、生姜揮發(fā)油、毛冬青總黃酮以及川芎嗪注射液均具有不同程度的增強(qiáng)腦保護(hù)作用,促進(jìn)腦缺血耐受形成;毛冬青總黃酮具有很