LRP與Vault結(jié)構(gòu)的初步研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文LRP與Vault結(jié)構(gòu)的初步研究姓名：鄭春雷申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：李振2001.4.1然于膠系統(tǒng)。實驗方法一、蛋白的表達(dá)與制備:融合蛋白ProteinC一LRP和GST一vPARP一C由本實驗室通過將LRPcDNA和vPARPC末端cDNA分別載人pXB和pGEX4T一1載體內(nèi)，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a篩選而來。將表達(dá)融合蛋白ProteinC一LRP和GST一vPARP一C的DH5。分別置于150m

2、lLB中并加人0.2mMIPTG22℃過夜培養(yǎng)。次日4℃收集菌體沉淀，加人MES進(jìn)行超聲粉碎后離心，收集上清，一80℃保存。二、Pul一do，實驗:GSH一Sepheros。一4B與GST一，PARP一C混合，4℃反應(yīng)2小時，離心所得沉淀即為GST一vPARP一Sepherose一4B取ProteinC一LRP分別加人到GST一vPARP一Sepherose一4B和GSHSepherose4B中，4℃反應(yīng)2小時，離心去上清，在該沉淀及P

3、roteinC一LRP粗蛋白中加人5xSDS上樣緩沖液，100℃加熱5分鐘，行7.5%變性聚丙烯酞胺凝膠(SDS一PAGE)電泳及WesternBlot(同方法五，一抗為抗LRP抗體)。三、GST一vPARP一C同ProteinC一LRP的結(jié)合實驗:在ProteinC一LRPGST一vPARP一C及二者的混合液中各加人1%Aprotinin及少許APMSF粉末。4℃充分反應(yīng)2小時后，各取0.5ml進(jìn)行二次不連續(xù)蔗糖密度梯度離心。四、不連

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