HPA、EP-CAM miRNA對(duì)人膽囊癌細(xì)胞抑瘤作用的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察以脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染HPA和EP-CAM基因?qū)θ四懩野┘?xì)胞株GBC-SD體內(nèi)抑瘤作用，探討聯(lián)合基因治療膽囊癌的可能性。
　　方法：1.脂質(zhì)體 Lipofectamine?2000轉(zhuǎn)染法將 pcDNATM6.2-HPA-DsRed, pcDNATM6.2GW/EmGFPmiR-EPCAM轉(zhuǎn)染人膽囊癌細(xì)胞株 GBC-SD。應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞目的基因的表達(dá)。
　　2.選用裸鼠40只，隨機(jī)分為5組。于裸鼠腋外側(cè)皮下分

2、別接種原始GBC-SD細(xì)胞組（陰性對(duì)照A組）、轉(zhuǎn)染空載體的GBC-SD細(xì)胞組（空白對(duì)照B組）、干擾Hpa基因的細(xì)胞（C組）、干擾EP-CAM基因的細(xì)胞（D組）和共干擾二者的細(xì)胞（E組），觀察裸鼠皮下移植瘤成瘤情況。自皮下接種后第7d起，每3d用游標(biāo)卡尺測(cè)量瘤體最長(zhǎng)徑(a)與最短徑(b)，觀察腫瘤體積變化，并計(jì)算抑瘤率。
　　3.應(yīng)用Western-blot法檢測(cè)五組腫瘤組織中Hpa、EP-CAM蛋白的表達(dá)，與陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組

3、比較差異變化。
　　4.采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組標(biāo)本中 Ep-CAM和 Hpa的表達(dá)情況，進(jìn)行對(duì)比分析。
　　5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:所有數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)軟件Spss16.0統(tǒng)計(jì)分析。采用了單因素方差分析（one-way ANOVA）和方差齊性檢驗(yàn)，秩和檢驗(yàn)，配對(duì)樣本t檢驗(yàn)，假設(shè)檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。
　　結(jié)果：1.RT-PCR:結(jié)果證實(shí)Hpa和EP-CAM分別及共轉(zhuǎn)染基因經(jīng)篩選后能在GBC-SD細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)。
　　2.

4、在裸鼠膽囊癌皮下移植瘤模型中，經(jīng)Hpa、EP-CAM轉(zhuǎn)染的膽囊癌細(xì)胞成瘤能力較陰性對(duì)照及空白對(duì)照組降低，C、D、E組腫瘤生長(zhǎng)速度及體積明顯低于前兩組（P<0.05）,共轉(zhuǎn)染組抑瘤率與單轉(zhuǎn)染組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　3.Western-blot結(jié)果顯示C、D、E組與A、B組比較Hpa、EP-CAM的蛋白表達(dá)面積大小不同,顏色不一。免疫組織化學(xué)法檢測(cè) C、D、E各組標(biāo)本中 Hpa和EP-CAM蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯小于A、