硫辛酸對阿爾茨海默病模型大鼠SOD、MDA、P-CREB水平的影響.pdf

1、背景:阿爾茨海默病是一種最常見的以認(rèn)知功能障礙為主要特征的的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，其主要病理特征包括大腦皮質(zhì)和海馬區(qū)域廣泛的神經(jīng)元喪失，細(xì)胞內(nèi)的神經(jīng)原纖維纏結(jié)和細(xì)胞外老年性β-amyloid(Aβ)斑塊沉積，目前我國大約有400萬老年癡呆患者，其中AD占到了一半及以上，AD患者腦中出現(xiàn)的大量高密度的淀粉樣β-蛋白(Aβ)以及Aβ具有的神經(jīng)毒性作用是導(dǎo)致AD的重要原因，Aβ可以通過誘導(dǎo)氧化應(yīng)激的產(chǎn)生來發(fā)揮其毒性作用，越來越多的證據(jù)表明，氧化

2、應(yīng)激是AD的早期事件。當(dāng)機(jī)體氧化及抗氧化體系失衡時，會產(chǎn)生過多的氧自由基，引起脂質(zhì)過氧化，丙二醛(MDA)就是脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，它可以造成組織損傷，超氧化物歧化酶(SOD)是機(jī)體的一種抗氧化劑，能夠清除體內(nèi)產(chǎn)生的氧自由基，避免體內(nèi)過氧化物質(zhì)的堆積。Camp反應(yīng)原件結(jié)合蛋白(creb)作為一種記憶功能蛋白，能夠調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元的生長發(fā)育，磷酸化的creb能夠通過調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)影響學(xué)習(xí)記憶功能。硫辛酸是一種超強(qiáng)型的抗氧化劑，被稱為“萬能

3、抗氧化劑”，它的抗氧化特性包括螯合金屬離子、清除活性自由基、再生內(nèi)源性抗氧化劑及修復(fù)氧化損傷等，有研究表明，硫辛酸能夠上調(diào)p-creb的水平，從而改善AD大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶功能。
　　目的:關(guān)于Aβ通過氧化應(yīng)激參與AD發(fā)病機(jī)制以及抗氧化藥物在AD治療中的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展，近年來已有不少的報(bào)道。本文主要就硫辛酸進(jìn)行研究，以期為AD的抗氧化治療提供線索和依據(jù)。
　　方法:健康清潔級SD雄性大鼠40只，按照隨機(jī)數(shù)字表法，隨機(jī)分為假手術(shù)

4、組，AD模型組，硫辛酸低劑量組和硫辛酸高劑量組，每組10只。造模前預(yù)給藥3周，硫辛酸低劑量組給予腹腔注射硫辛酸25mg/kg·d，硫辛酸高劑量組給予腹腔注射硫辛酸100mg/kg.d，假手術(shù)組、模型組給予等體積的生理鹽水腹腔注射1次/日，給藥三周后，采用立體定位儀向大鼠雙側(cè)海馬區(qū)注射凝聚態(tài)Aβ1-42各2.5μl建立AD動物模型，期間持續(xù)給藥，造模1周后通過Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)測試各實(shí)驗(yàn)組大鼠逃避潛伏期及穿越平臺次數(shù)的變化，來觀察硫辛

5、酸對大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響，并檢測四組大鼠海馬區(qū)SOD活力及MDA含量，通過HE染色觀察大鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化，采用Western Blot法檢測磷酸化creb蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.各組大鼠Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)逃避潛伏期及穿越平臺次數(shù)比較四組大鼠逃避潛伏期不同(F=6.858，P＜0.05)，穿越平臺次數(shù)不同(F=14.831，P＜0.05)。模型組，硫辛酸低劑量組和高劑量組比假手術(shù)組逃避潛伏

6、期明顯延長(P＜0.05），穿越平臺次數(shù)明顯減少(P＜0.05）。
　　2.各組大鼠海馬HE染色的比較假手術(shù)組海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞排列整齊，形態(tài)正常，結(jié)構(gòu)致密，分布均勻，數(shù)量多;模型組海馬CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞排列稀疏，明顯減少，結(jié)構(gòu)紊亂，數(shù)量減少;治療組與模型組大鼠相比，各治療組大鼠海馬形態(tài)均不同程度恢復(fù)，以高劑量組最為明顯，神經(jīng)元數(shù)量增多，細(xì)胞排列整齊，結(jié)構(gòu)致密，形態(tài)正常，分布均勻。
　　3.各組大鼠海馬組織SOD活力及MD

7、A含量的比較四組大鼠海馬組織SOD活力不同(F=78.154 P＜0.05)，假手術(shù)組較模型組大鼠海馬組織SOD活力處于較高水平(P＜0.05），治療組與模型組相比，各治療組大鼠海馬組織SOD活力均較模型組的水平高(P＜0.05），高劑量組較低劑量組增高明顯（P＜0.05）。
　　四組大鼠海馬組織MDA含量不同(F=17.411 P＜0.05)，假手術(shù)組較模型組大鼠海馬組織MDA含量處于較低水平（P＜0.05），治療組較模型組大鼠

8、海馬組織MDA含量均降低(P＜0.05），高劑量組較低劑量組降低明顯(P＜0.05)。
　　4.大鼠海馬組織中Western Blot法檢測p-CREB蛋白水平比較磷酸化的creb在四組大鼠海馬組織表達(dá)不同(F=68.528，P＜0.05)，模型組比假手術(shù)組表達(dá)明顯降低（P＜0.05），硫辛酸治療組比模型組表達(dá)增多(P＜0.05），高劑量組比低劑量組表達(dá)增多(P＜0.05）。
　　結(jié)論:采用在大鼠雙側(cè)海馬區(qū)注射凝聚態(tài)Aβ1-