芹菜素對(duì)阿爾茨海默病模型大鼠HMGB1-RAGE-NF-κB通路的影響.pdf

1、目的：隨著時(shí)代的進(jìn)展、生活質(zhì)量的提高，人們除了對(duì)物質(zhì)的追求之外，對(duì)精神生活的追求也更加注重，然而人們晚年的生活質(zhì)量卻被阿爾茨海默?。ˋlzheimer's disease，AD）大大的影響著。阿爾茨海默病引起的認(rèn)知障礙是影響患者生活質(zhì)量的主要因素，據(jù)統(tǒng)計(jì)在2012年有3560萬(wàn)人患有癡呆，每年增加770萬(wàn)個(gè)新發(fā)病例。阿爾茨海默病是一種治療效果欠佳的神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，隨著年齡的增長(zhǎng)發(fā)病率隨之增高。具有記憶力減退、認(rèn)知障礙、精神情感異常、行

2、為障礙等臨床癥狀及老年斑、神經(jīng)原纖維纏結(jié)、海馬錐體細(xì)胞顆?？张葑冃约吧窠?jīng)元缺失等病理特征。可能的發(fā)病機(jī)制包括 Aβ沉積、tau蛋白過(guò)度磷酸化、神經(jīng)血管功能紊亂、細(xì)胞周期異常、炎癥、氧化應(yīng)激、線粒體功能障礙。有研究證明各種可能的發(fā)病機(jī)制的共同點(diǎn)是腦內(nèi)的炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)，腦內(nèi)神經(jīng)損害、神經(jīng)原纖維纏結(jié)均可導(dǎo)致神經(jīng)炎癥。AD的炎癥反應(yīng)可以由Aβ沉積物周?chē)挠谢钚缘男∩窠?jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分泌促炎介質(zhì)造成神經(jīng)損害所引起。
　　高遷移率組蛋白1(High

3、Mobility Group-B1,HMGB1)是一種致炎因子，海馬的小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，甚至星形膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元都可能釋放HMGB1，HMGB1也能引起炎性反應(yīng)導(dǎo)致細(xì)胞衰亡。HMGB1與Aβ的毒性及代謝至關(guān)重要，Aβ引起的炎癥反應(yīng)可引起 HMGB1增加。HMGB1主要與晚期糖基化終末產(chǎn)物（Receptor For Advanced Glycation Endproducts,RAGE）結(jié)合引起核因子-κB（nuclear factor-κ

4、B，NF-κB)由胞漿進(jìn)入胞核誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)?？梢?jiàn)如果抑制 HMGB1/RAGE/NF-κB通路，可降低Aβ引起的炎癥反應(yīng)，減緩阿爾茨海默病的進(jìn)程。
　　芹菜素（Apigenin，Api）是可由多種水果、植物、蔬菜中提取出的黃酮類(lèi)物質(zhì)，具有無(wú)毒、不致突變的特點(diǎn)。研究表明，芹菜素有抑制炎癥的作用。芹菜素作為治療阿爾茨海默病的可能藥物的研究也越來(lái)越廣泛，而其對(duì)于 HMGB1/RAGE/NF-κB通路的作用卻鮮有研究。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究芹菜素

5、對(duì)AD模型大鼠海馬組織中HMGB1/RAGE/NF-κB通路的影響，進(jìn)一步探討阿爾茨海默病的發(fā)病機(jī)制及芹菜素在阿爾茨海默病中如何發(fā)揮作用。
　　方法：選取48只鼠齡10-12周的成年健康清潔級(jí)SD雄性大鼠（已剔除先天性癡呆及其他條件不符合實(shí)驗(yàn)要求的大鼠），根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法，將實(shí)驗(yàn)用SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組（Sham group）、假手術(shù)+芹菜素組（Sham+Api group）、模型組（AD group）、模型+芹菜素組（AD+A

6、pi group）。Sham+Api組及AD+Api組各通過(guò)腹腔注射給予芹菜素20mg/kg，每日1次。AD組及Sham組僅給予等體積的溶劑，每日1次。使用腦立體定位儀將溶解后的Aβ1-42注入AD組、AD+Api組大鼠海馬區(qū)，將溶解Aβ1-42的溶劑注入Sham組、Sham+Api組的海馬區(qū)。采用Morris水迷宮對(duì)大鼠進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試，H E染色觀察各組之間病理變化的不同，免疫組化、Western Blot測(cè)定GFAP、Iba-1、H

7、MGB1、RAGE、NF-κB p65的表達(dá)。
　　結(jié)果：1 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn):通過(guò)Morris水迷宮實(shí)驗(yàn),可得出AD組的學(xué)習(xí)記憶功能明顯次于其他組。2 HE染色:各組大鼠海馬CA1區(qū)病理變化不同,AD組大部分海馬組織CA1區(qū)細(xì)胞失去正常形態(tài)，染色加深，排列不齊；AD+Api組異常細(xì)胞較AD模型組減少。3免疫組織化學(xué):GFAP、Iba-1在AD組表達(dá)，給予芹菜素后減少。HMGB1陽(yáng)性顆粒于AD組主要在胞漿，其余三組胞核多見(jiàn)。

8、AD組 RAGE的表達(dá)明顯多于其他各組。AD組NF-κB p65主要表達(dá)在胞核，其余三組主要表達(dá)在胞漿。4Western Blot:AD組GFAP、Iba-1、HMGB1、RAGE的蛋白表達(dá)最多（P<0.05）；AD組NF-κB p65在胞漿的表達(dá)低于另外三組（P<0.05），而其在胞核的表達(dá)多于另外三組（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.實(shí)驗(yàn)中使用 Aβ1-42在大鼠雙側(cè)海馬區(qū)注射，成功復(fù)制了阿爾茨海默病模型，大鼠出現(xiàn)

9、認(rèn)知、行為異常，海馬區(qū)也出現(xiàn)阿爾茨海默病時(shí)所具有的病理變化。
　　2.Aβ1-42的注射使小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞激活，GFAP、Iba-1、HMGB1、RAGE、NF-κB p65的表達(dá)增多，說(shuō)明Aβ1-42確實(shí)可引起炎性反應(yīng)，此反應(yīng)在阿爾茨海默病中起到作用。
　　3.芹菜素可減輕 Aβ1-42所致的學(xué)習(xí)記憶能力下降、行為異常；可使
　　GFAP、Iba-1、HMGB1、RAGE、NF-κB p65的表達(dá)降低，說(shuō)