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文檔簡介
1、第一部分:CD133免疫磁珠分選臍血內(nèi)皮祖細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定 目的:建立具備高效增殖、血管生成與遷移能力的臍血內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells,EPCs)分離培養(yǎng)鑒定方法。 方法:應(yīng)用免疫磁珠分選純化臍血單個(gè)核細(xì)胞中的CD133+細(xì)胞,體外EGM-2MV培養(yǎng)液培養(yǎng)擴(kuò)增,通過形態(tài)學(xué)、細(xì)胞表面標(biāo)志及功能鑒定EPCs,并與臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothe
2、lial cells,HUVECs)作比較. 結(jié)論:通過CD133免疫磁殊分選臍血單個(gè)核細(xì)胞,可培養(yǎng)出具有高效增殖、血管生成與遷移能力的EPCs。 第二部分:膠質(zhì)瘤誘導(dǎo)內(nèi)皮祖細(xì)胞血管新生的機(jī)制初探 目的:初步探討內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells,EPCs)參與膠質(zhì)瘤血管新生的機(jī)制。 方法:通過U87膠質(zhì)瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清作用于EPCs,觀察EPCs體外血管形成以及遷移能力
3、,并檢測VEGFR-1、VEGFR-2與MMP-9的表達(dá)。VEGFR-2 siRNA轉(zhuǎn)染EPCs,觀察對EPCs參與血管新生的影響,檢測VEGFR-2、MMP-9、Akt和ERK的表達(dá)。 結(jié)論:膠質(zhì)瘤細(xì)胞通過上調(diào)EPCs VEGFR-2調(diào)控MMP-9、Akt和ERK的表達(dá),從而誘導(dǎo)EPCs參與其血管新生。 第三部分:HSV-TK轉(zhuǎn)染的內(nèi)皮祖細(xì)胞的靶向血管新生治療膠質(zhì)瘤體內(nèi)外實(shí)驗(yàn) 目的:以內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothe
4、lial progenitor cells,EPCs)為載體,探討轉(zhuǎn)染HSV-TK的EPCs,靶向血管新生治療膠質(zhì)瘤體內(nèi)外治療作用。 方法:重組腺病毒Ad.CMV-tk轉(zhuǎn)染EPCs后,經(jīng)GCV作用,觀察其敏感性;將轉(zhuǎn)染HSV-TK的EPCs和U87與U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞、臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞,以不同比例混合,經(jīng)GCV作用,以MTT法檢測細(xì)胞存活率,流式細(xì)胞儀檢測凋亡。將轉(zhuǎn)染HSV-TK的EPCs經(jīng)尾靜脈注入裸鼠皮下膠質(zhì)瘤模型,觀察各組腫
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