曲美他嗪和雷米普利對(duì)慢性心力衰竭大鼠心肌纖維化的影響.pdf

1、心力衰竭是由心臟器質(zhì)性或功能性疾病引起的一組臨床綜合征,是各種心臟病變發(fā)生發(fā)展的終末階段。其主要決定機(jī)制是心室重塑,同時(shí)以細(xì)胞外基質(zhì)平衡紊亂導(dǎo)致的心肌纖維化最為顯著。心肌纖維化也是多種心臟疾病發(fā)生發(fā)展的共同病理改變,是CHF的重要病理基礎(chǔ)。曲美他嗪(trimetazidine,TMZ)屬哌嗪類衍生物,主要通過(guò)改善心肌代謝能力、緩解心肌缺血、提高心肌收縮力和縮小梗死面積發(fā)揮作用,在臨床應(yīng)用中取得了良好療效,但在對(duì)心力衰竭治療方面的療效是否

2、與ACEI類藥相同及聯(lián)合應(yīng)用時(shí)的臨床效果需進(jìn)一步研究,本實(shí)驗(yàn)旨在探討在相同條件下通過(guò)研究轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1和I型膠原的表達(dá),比較曲美他嗪與雷米普利單用及聯(lián)合應(yīng)用時(shí)對(duì)慢性心力衰竭大鼠心肌纖維化的影響。
　　目的:
　　通過(guò)縮窄腎上腹主動(dòng)脈法建立大鼠慢性心力衰竭模型。造模成功后,分別通過(guò)免疫組織化學(xué)染色法及RT-PCR法觀察TGF-β1和I型膠原在心力衰竭大鼠左心室心肌組織中的表達(dá),探討曲美他嗪和雷米普利單獨(dú)用藥及合并應(yīng)用時(shí)對(duì)慢

3、性心力衰竭大鼠心肌纖維化的影響。
　　方法:
　　1選取清潔級(jí)雄性Wistar大鼠60只,隨機(jī)抽取10只大鼠為假手術(shù)組,其余采用腎上腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)建立慢性心衰模型。以左室舒張末壓(LVEDP)≥15mmHg作為成模標(biāo)準(zhǔn)。其中,假手術(shù)組只分離出腹主動(dòng)脈,不做結(jié)扎。
　　2當(dāng)各組大鼠達(dá)觀察點(diǎn),檢測(cè)大鼠左室舒張末壓及左室內(nèi)壓上升和下降最大速率(±dp/dtmax),利用多導(dǎo)電生理記錄儀記錄。取左心室并計(jì)算左心室質(zhì)量指數(shù)(LV

4、MI)。
　　3將取出的左心室心肌組織進(jìn)行HE染色、Masson三色染色觀察大鼠其的病理學(xué)改變,并檢測(cè)膠原容積分?jǐn)?shù)(CVF)。
　　4各組大鼠左心室心肌組織的超微結(jié)構(gòu)在透射電鏡下進(jìn)行觀察。
　　5免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)大鼠左心室心肌組織中TGF-β1蛋白和type I Collagen蛋白的表達(dá)。
　　6通過(guò)RT-PCR法檢測(cè)各組大鼠左心室心肌組織TGF-β1mRNA和type I Collagen mRNA的表

5、達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1各組大鼠血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)如下:假手術(shù)組、模型組、曲美他嗪組、雷米普利組和聯(lián)合用藥組大鼠±dp/dtmax分別為(5330.63±121.82) mmHg/s和(4306.79±134.66)mmHg/s、(4164.84±57.34)mmHg/s和(2896.17±72.91)mmHg/s、(4784.03±81.43)mmHg/s和(3364.30±103.78)mmHg/s、(4856.88±75.

6、27)mmHg/s和(3430.47±148.11) mmHg/s、(5042.14±112.02)mmHg/s和(3993.86±70.47)mmHg/s;假手術(shù)組、模型組、曲美他嗪組、雷米普利組和聯(lián)合用藥組大鼠LVEDP分別為:(6.15±0.60)mmHg、(16.97±0.58)mmHg、(9.69±0.17)mmHg、(9.35±0.27)mmHg、(7.89±0.51)mmHg。與模型組相比較,三組用藥組±dp/dtmax均

7、明顯升高(p<0.01),LVEDP均明顯下降(p<0.01),曲美他嗪組與雷米普利組無(wú)明顯差異(p﹥0.05),聯(lián)合用藥組變化最為明顯(p<0.01)。與假手術(shù)組相比較,模型組±dp/dtmax明顯下降(P<0.01),LVEDP明顯上升(P<0.01),與模型組相比較,三組用藥組±dp/dtmax均上升(P<0.01),LVEDP均下降(P<0.01),其中聯(lián)合應(yīng)用兩種藥物組變化最為明顯(P<0.01)。
　　2大鼠心肌組織病

8、理學(xué)變化的觀察:蘇木素-伊紅(HE)染色:假手術(shù)組心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)清、連接密;模型組心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)疏松,有斷裂,排列紊亂;藥物干預(yù)組較模型組有明顯改變,其中聯(lián)合兩種藥物應(yīng)用組改善最顯著。Masson染色:通過(guò)Masson染色后,鏡下觀察假手術(shù)組,間質(zhì)內(nèi)未見(jiàn)藍(lán)色膠原聚集;模型組在心肌細(xì)胞及血管周圍可觀察到大片藍(lán)色膠原沉積;藥物干預(yù)組觀察到少量的膠原沉積,以聯(lián)合用藥組膠原沉積最少。
　　3各組大鼠LVMI和CVF如下:假手術(shù)組、模型組、曲美

9、他嗪組、雷米普利組和聯(lián)合用藥組大鼠 LVMI和CVF分別為(2.10±0.12)‰,(8.54±0.72)％;(4.76±0.25)‰,(31.92±0.99)%;(3.07±0.15)‰,(18.06±0.60)%;(2.93±0.24)‰,(17.35±0.65)%;(2.57±0.21)‰,(12.10±1.31)%。相較于假手術(shù)組,模型組大鼠的CVF和LVMI均明顯上升(P<0.01),相較于模型組,三組用藥組的CVF和LVMI

10、均明顯下降(P<0.01),其中,聯(lián)合用藥組下降最顯著(P<0.01)。
　　4透射電鏡下觀察各組大鼠左心室心肌組織的超微結(jié)構(gòu)變化如下:假手術(shù)組:觀察到存在正常的肌小結(jié),細(xì)胞排列整齊,肌絲完整,有少量的膠原纖維附著于間質(zhì)中;模型組部分肌絲出現(xiàn)斷裂,排列疏松、結(jié)構(gòu)錯(cuò)亂,線粒體數(shù)量增多,空泡化,呈叢狀聚集,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)呈擴(kuò)張狀態(tài),部分肌細(xì)胞出現(xiàn)裂解,大量膠原呈網(wǎng)狀交織,穿梭于間質(zhì)中;用藥組分別有不同程度的改善,其中,聯(lián)合用藥組改善效果最佳,

11、曲美他嗪組和雷米普利組間無(wú)明顯差別。
　　5免疫組化法觀察各組大鼠左心室心肌組織 TGF-β1蛋白和COL-I蛋白的表達(dá)情況如下:假手術(shù)組無(wú)明顯陽(yáng)性反映,即未見(jiàn)明顯棕黃色顆粒沉積;模型組呈強(qiáng)陽(yáng)性反應(yīng),用藥組陽(yáng)性反應(yīng)明顯減弱,其中,聯(lián)合兩種藥物組最弱。
　　6 RT-PCR法觀察各組大鼠左心室心肌組織中TGF-β1mRNA和COL-ImRNA的表達(dá)情況:與假手術(shù)組相比較,模型組TGF-β1mRNA和COL-I mRNA水平均明