辛伐他汀和福辛普利對慢性心力衰竭大鼠心肌纖維化及TGF-β1和CTGF表達的影響.pdf

1、慢性心力衰竭(ChronicHeartFailure,CHF)是各種心血管疾病的終末階段。隨著我國老齡化社會的到來,患病率越來越高。同時新治療觀念也隨著對CHF發(fā)生機制的研究深入而不斷提出。研究發(fā)現(xiàn)有效抑制神經(jīng)內(nèi)分泌-細胞因子系統(tǒng)通過信號傳導(dǎo)途徑和細胞凋亡過程所導(dǎo)致的心室重構(gòu),對CHF的治療和預(yù)后方面具有重要意義,其中轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)和結(jié)締組織生長因子(conne

2、ctivetissuegrowthfactor,CTGF)與纖維化的關(guān)系近年來引起了人們的關(guān)注。他汀類藥物是羥甲基戊二酰輔酶A(hydroxy-methyl-glutarylcoenzymeA,HMG-CoA)還原酶抑制劑,研究發(fā)現(xiàn)在治療CHF過程中具有與降脂作用無關(guān)的抗心肌纖維化作用,但是其療效是否與被稱為治療CHF基石的ACEI類藥相同及二者聯(lián)合應(yīng)用的療效是否優(yōu)于單獨用藥的報道甚少,本研究旨在探討在相同條件下比較辛伐他汀與福辛普利單

3、用及聯(lián)合應(yīng)用對慢性心力衰竭大鼠心肌纖維化的影響及分子機制。
　　目的:
　　采用腎上腹主動脈縮窄方法建立CHF心肌纖維化的動物模型,采用免疫組織化學(xué)染色、Western-blot、RT-PCR方法,從細胞水平和分子水平觀察TGF-β1和CTGF在辛伐他汀組、福辛普利組及聯(lián)合用藥組中的表達情況,探討用藥組之間抗心肌纖維化的療效及分子機制。
　　方法:
　　1.清潔級雄性Wistar大鼠60只,隨機抽取10只作為假手

4、術(shù)組,其余大鼠全部采用腎上腹主動脈縮窄術(shù)制作CHF模型。以左室舒張末壓(leftventricularenddiastolicpressure,LVEDP)≥15mmHg作為成模標(biāo)準(zhǔn)。待模型建立成功后,將剩余大鼠隨機分為4組,模型組、辛伐他汀組、福辛普利組、聯(lián)合用藥組(辛伐他汀+福辛普利),每組10只。假手術(shù)組只做分離不結(jié)扎。
　　2.各組大鼠到達觀察終點時,采用多導(dǎo)電生理記錄儀檢測血流動力學(xué)參數(shù)LVEDP及左室內(nèi)壓上升、下降最大

5、速率(leftventricularpressureriseandfall,±dp/dtmax),取左心室并計算左心室質(zhì)量指數(shù)(theleftventricularmassindex,LVMI)。
　　3.采用蘇木素-伊紅(HE)染色和Masson染色法觀察各組大鼠左心室心肌組織病理學(xué)改變,并檢測左心室心肌膠原容積分?jǐn)?shù)(collagenvolumefraction,CVF)。
　　4.采用透射電鏡觀察各組大鼠左心室心肌組織超

6、微結(jié)構(gòu)。
　　5.采用SP免疫組織化學(xué)染色法檢測各組大鼠左心室心肌組織TGF-β1和CTGF表達。
　　6.Westen-blot檢測各組大鼠左心室心肌組織中TGF-β1和CTGF蛋白表達水平。
　　7.采用RT-PCR法檢測各組大鼠左心室心肌組織TGF-β1和CTGFmRNA表達水平。
　　結(jié)果:
　　1.各組大鼠的血流動力學(xué)參數(shù):模型組、辛伐他汀組、福辛普利組、聯(lián)合用藥組和假手術(shù)組大鼠LVEDP,±dp

7、/dtmax分別為(18.66±1.54)mmHg,(2840±189.63)mmHg,(4098.78±289.77)mmHg;(11.44±1.88)mmHg,(4568.34±306.11)mmHg,(3654.55±105.45)mmHg;(10.58±1.90)mmHg,(4633.37±267.35)mmHg,(3702.94±198.86)mmHg;(7.46±1.64)mmHg,(4787.65±270.32)mmHg,

8、(4034.54±134.74)mmHg;(4.43±1.21)mmHg,(5156.20±298.56)mmHg,(4350.34±168.76)mmHg。模型組與假手術(shù)組相比±dp/dtmax顯著下降(P<0.01),LVEDP顯著上升(P<0.01),與模型組相比較,辛伐他汀組、福辛普利組和聯(lián)合用藥組±dp/dtmax顯著上升(P<0.01),LVEDP顯著下降(P<0.01),以聯(lián)合用藥組改變最為顯著(P<0.01)。
　

9、　2.各組大鼠LVMI和CVF:模型組、辛伐他汀組、福辛普利組、聯(lián)合用藥組和假手術(shù)組大鼠LVMI和CVF分別為(2.90±0.23)‰,(33.45±2.09)％;(2.41±0.20)‰,(17.67±1.32)%;(2.53±0.16)‰,(15.86±1.42)%;(2.05±0.22)‰,(12.05±1.3)%;(1.62±0.15)‰,(8.72±1.22)%。模型組與假手術(shù)組相比LVMI和CVF明顯上升(P<0.01),與

10、模型組相比較,辛伐他汀組、福辛普利組和聯(lián)合用藥組LVMI和CVF明顯下降(P<0.01),以聯(lián)合用藥組改變最為顯著(P<0.01)。
　　3.各組大鼠左心室心肌組織病理學(xué)改變HE染色:假手術(shù)組心肌細胞結(jié)構(gòu)清晰、排列整齊、連接緊密;模型組心肌細胞結(jié)構(gòu)疏松且有斷裂、排列紊亂、炎細胞增多,有明顯出血壞死;辛伐他汀組,福辛普利組和聯(lián)合用藥組心肌細胞損害較模型組顯著減輕,其中以聯(lián)合用藥組改變最為顯著。Masson染色:假手術(shù)組無明顯的膠原沉

11、積;模型組可見大片藍色的心肌膠原沉積于心肌細胞及血管周圍;辛伐他汀組,福辛普利組和聯(lián)合用藥組見少量的膠原沉積,以聯(lián)合用藥組最少。
　　4.各組大鼠左心室心肌細胞超微結(jié)構(gòu)觀察假手術(shù)組大鼠心肌肌原纖維排列整齊,細胞器結(jié)構(gòu)正常,心肌間質(zhì)極少有膠原纖維沉積。模型組心肌肌原纖維排列整齊紊亂,細胞器損傷嚴(yán)重,心肌間質(zhì)有較多的膠原纖維沉積。用藥組上述表現(xiàn)明顯改善,以聯(lián)合用藥組改變最為顯著。
　　5.各組大鼠左心室心肌組織TGF-β1和CT

12、GF的表達假手術(shù)組未見明顯陽性反映,模型組可見大量棕黃色顆粒呈強陽性反應(yīng),辛伐他汀組,福辛普利組和聯(lián)合用藥組棕黃色顆粒表達明顯減少,以聯(lián)合用藥組陽性反應(yīng)最弱。
　　6.各組大鼠左心室心肌組織TGF-β1和CTGF表達水平模型組TGF-β1和CTGF蛋白及mRNA水平與假手術(shù)組相比均明顯上升(P<0.01),辛伐他汀組,福辛普利組和聯(lián)合用藥組TGF-β1和CTGF蛋白及mRNA水平與模型組相比均明顯降低(P<0.01),辛伐他汀組與