大豆7S、11S蛋白酶解模擬分析及疏水性對抗氧化活性的影響.pdf

1、本文研究了“活性肽搜尋與蛋白模擬酶解”程序對蛋白質的模擬酶解與實驗結果的相關性，并利用大孔吸附樹脂的分級技術分析水解產物疏水性與抗氧化活性的關系，最后經凝膠過濾層析、反相高效液相色譜及液相-質譜聯(lián)用獲得了具有較強抗氧化活性的組分序列，進一步討論了模擬酶解預測抗氧化肽的可行性及疏水性對肽的抗氧化活性的影響。論文主要研究結論如下：
　　 以“活性肽搜尋與蛋白模擬酶解”程序為工具，對大豆7S、11S蛋白進行模擬酶解，根據(jù)實驗酶解產物分

2、子量分布對模擬結果進行分析。結果表明：堿性蛋白酶Alcalase和中性蛋白酶酶解產物水解度較高(DH＞30％)，實驗結果與模擬酶解所得片段分子量分布在重均分子量上線性關系顯著(P＜0.01)，相關性較好(r=0.979～0.999)；胰凝乳蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解產物因水解度較低(DH＜20％)，與模擬結果存在一定差異。
　　 采用DA201-C型大孔吸附樹脂對7S堿性蛋白酶水解產物進行吸附，以不同濃度乙醇進行梯度洗脫，測定各洗脫

3、組分的氨基酸組成和抗氧化活性，并計算平均疏水性Q值。結果顯示：組分平均疏水性Q值隨著乙醇濃度的提高而升高；DPPH·自由基清除能力、Fe2+螯合能力以及亞油酸過氧化抑制能力與平均疏水性呈顯著正相關(P＜0.01～0.05)，還原力與平均疏水性相關性不顯著(P＞0.05)。
　　 利用Sephadex G-15凝膠過濾層析、半制備RP-HPLC對水解物進行分離純化，經LC-MS鑒定得到12個氨基酸序列，分別為GCGF、QPEN、Y

4、GALQ、NP、EGTNNP、YGSL、VPAGCT、EGAF、AY、LLYA/LIYA/ⅡYA/PEYA、WIY/WLY和WF，其中9條序列在大豆7S蛋白序列中找到相同或相似的片段，1條序列為已證實的抗氧化肽，數(shù)條序列與已知抗氧化肽有著類似結構或氨基酸組成，說明模擬酶解蛋白分析預測抗氧化肽具有一定的可行性。通過計算12個肽段的疏水性Q值并比較其抗氧化活性，結果表明亞油酸過氧化抑制能力與其疏水性Q值呈顯著正相關(P＜0.01)，疏水性Q