雞蛋卵白蛋白酶解物抗氧化肽研究.pdf

1、雞蛋卵白蛋白酶解物抗氧化肽研究徐明生摘要雞蛋是人類攝取營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的一種重要來(lái)源，幾乎包含了胚胎發(fā)育所需的所有蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)和生長(zhǎng)因子。雞蛋中的蛋白質(zhì)主要存在于蛋清和蛋黃中，其中蛋清蛋白的種類和含量最為豐富。卵白蛋白是蛋清中的主要蛋白質(zhì)，占蛋清蛋白質(zhì)的54％，是獲得生物活性肽的很好資源。本文以雞蛋卵白蛋白為對(duì)象，采用生物酶解、抗氧化試驗(yàn)、離子色譜、反相高效液相色譜、電噴霧質(zhì)譜等方法，系統(tǒng)研究了酶水解各主要參數(shù)，酶解物抗氧化活性

2、，抗氧化肽的分離純化和結(jié)構(gòu)表征，為開發(fā)雞蛋抗氧化肽產(chǎn)品提供理論基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下： 1.獲得了簡(jiǎn)便、快速、高純度的雞蛋卵白蛋白提取工藝路線。采用Q-SepharoseFF陰離子色譜法對(duì)雞蛋卵白蛋白進(jìn)行分離。通過(guò)對(duì)蛋清上樣量、緩沖液pH值、緩沖液濃度和洗脫液離子強(qiáng)度等優(yōu)化試驗(yàn)，獲得的工藝條件為：雞蛋蛋清用2倍的水稀釋，將其pH調(diào)至6.0沉淀去除卵粘蛋白，40mLQ-SepharoseFF陰離子柱分離，蛋清上樣量140mL，用0.1

3、5mol/LpH8.0的NaCl水溶液洗脫，可獲得1058mg卵白蛋白，卵白蛋白的得率為55％，經(jīng)反相高效液相色譜檢測(cè)純度為92％。 2.以羥自由基清除率為指標(biāo)，研究了胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶水解雞蛋卵白蛋白所得酶解物的抗氧化活性。研究表明胃蛋白酶的酶解物羥自由基清除率最高。 3.確定了酶解物羥自由基清除率≥40％的酶解條件。采用響應(yīng)曲面分析法對(duì)底物濃度[S]、胃蛋白酶添加量[E]、酶解時(shí)間進(jìn)行分析，建立了回歸模

4、型，確定了酶解條件，即底物濃度2.22％-3.76％、酶添加量8738.24u/g-11176.63u/g、水解時(shí)間4.05-7.77h。 4.首次采用多種抗氧化活性試驗(yàn)，全面研究了雞蛋卵白蛋白酶解物的抗氧化活性。體外試驗(yàn)結(jié)果表明：酶解物對(duì)堿性鄰苯三酚自氧化產(chǎn)生的超氧陰離子、Fenton反應(yīng)產(chǎn)生的羥基自由基、亞油酸氧化體系中亞油酸的氧化均有明顯的抑制作用，且呈現(xiàn)-定的量效關(guān)系。5mg/mL的雞蛋卵白蛋白酶解物，對(duì)超氧陰離子的抑制

5、率為45％，對(duì)羥基自由基清除率為56％，對(duì)亞油酸氧化的抑制能力相當(dāng)于0.2mg/mLVE的抑制能力，均顯著高于同濃度的卵白蛋白的抑制能力(p＜0.05)。D-半乳糖復(fù)制衰老小鼠模型的體內(nèi)抗氧化試驗(yàn)的研究結(jié)果表明：高、中劑量的雞蛋卵白蛋白酶解物能極顯著抑制衰老小鼠血清和肝臟中SOD、GSH-Px、CAT和T-AOC活性的下降(p＜0.01)；同時(shí)能極顯著降低衰老小鼠血清和肝臟MDA的水平(p＜0.01)。 5.探討了不同分子量的雞

6、蛋卵白蛋白酶解物的抗氧化活性。酶解物用三種不同的超濾膜(M]CO10，5and3kDa)分成四個(gè)組分。各個(gè)組分顯示出不同的抗氧化活性，其中分子量小于3kDa的組分最強(qiáng)。 6.用離子交換色譜和反相高效液相色譜分離獲得了三種雞蛋卵白蛋白抗氧化肽。采用Q-SepharoseFF離子交換層析法對(duì)低分子量酶解物進(jìn)行分離，分級(jí)等度洗脫，共獲得5個(gè)組分(OPQ1，OPQ2，OPQ3，OPQ4和OPQ5)。再將抗氧化能力最強(qiáng)的OPQ3組份用反相

7、高效液相色譜分離純化，獲得了四個(gè)肽，其中OPQ3-1、OPQ3-2和OPQ34具有較強(qiáng)的抗氧化能力，對(duì)羥自由基的清除率分別達(dá)到78.6％、81.8％和82.3％。 7.采用ESI-MS/MS，對(duì)反相高效液相色譜分離純化獲得的3個(gè)抗氧化能力較強(qiáng)的雞蛋卵白蛋白抗氧化肽的氨基酸序列進(jìn)行了測(cè)定。OPQ3-1的分子量為408.14Da，由3個(gè)氨基酸殘基按序列Pro-Glu-Tyr組成；OPQ3-2的分子量為473.19Da,由4個(gè)氨基酸殘