洋蟲成蟲蛋白酶解液的制備及抗氧化功能研究.pdf

1、洋蟲體內(nèi)含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，包括多種人體必需氨基酸、維生素、微量元素和不飽和脂肪酸等，具有較高的開發(fā)價(jià)值。本文以洋蟲成蟲為原料，首次研究了洋蟲成蟲蛋白的提取、酶解以及蛋白酶解液在抗氧化方面的活性，確定了蛋白最佳提取方法，并優(yōu)化了酶解工藝，分離、制備出活性較高的洋蟲成蟲蛋白類物質(zhì)，并對其具有的抗氧化和抗衰老活性進(jìn)行了研究和分析。結(jié)果如下： 分別采用稀堿法、鹽提法和緩沖液(Tris-HCl)法研究了洋蟲成蟲蛋白的提取，其中，稀堿提蛋

2、白法的蛋白質(zhì)得率最高，最佳工藝指標(biāo)為：堿液濃度1.0％、溫度80℃、時(shí)間60min、固液比1:15時(shí)蛋白質(zhì)得率有最大值；其次為Tris-HCl提蛋白法，最佳工藝指標(biāo)為：Tris-HCl液pH值8.1、抽提溫度10℃、抽提時(shí)間30min、固液比1:10時(shí)蛋白質(zhì)得率有最大值；鹽提蛋白法得率最低，最佳工藝指標(biāo)為：鹽液濃度1.0％、溫度20℃、時(shí)間2h、固液比1:10時(shí)蛋白質(zhì)得率有最大值。3種方法比較，稀堿法提取效果最佳。 洋蟲成蟲蛋白

3、脫脂后，分別利用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶和胃蛋白酶對脫脂洋蟲成蟲蛋白進(jìn)行酶解，分析各種蛋白酶的水解效率、蛋白溶出系數(shù)以及平均肽鏈長度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，木瓜蛋白酶酶解液中的各項(xiàng)指標(biāo)均達(dá)到了較優(yōu)水平，即水解效率可達(dá)19.61％、蛋白溶出系數(shù)為2.52、平均肽鏈長度為5.10左右。因此，確定木瓜蛋白酶為首選用酶。 研究了酶用量、溫度、pH值、時(shí)間、底物濃度等條件對洋蟲成蟲蛋白水解度(DH)的影響。分析影響較大的因素，確定其水平變化范

4、圍，通過4因子二次旋轉(zhuǎn)回歸正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)響應(yīng)面分析，獲得最佳酶解工藝條件為：木瓜蛋白酶用量2225U/g，溫度42℃，時(shí)間4 h時(shí)，水解度可達(dá)到22.67％。 用截留分子量分別為10000Da和6000Da的超濾膜將洋蟲成蟲蛋白酶解液分離成3個(gè)組份,并在體外非油體系中，分別對不同分子量大小組份的抗氧化活性進(jìn)行研究。所得結(jié)果與強(qiáng)抗氧化劑V<,C>相比表明：3個(gè)組份都具有較強(qiáng)的清除DPPH自由基、羥自由基和超氧自由基的能力，而且還原能

5、力較強(qiáng)。但是，其中以組份Ⅰ(分子量<6000 Da)的抗氧化能力最強(qiáng)，它能很好的清除超氧陰離子自由基，但清除效果與V<,C>相比，差異不顯著；清除羥基自由基的效果與V<,C>相持平；清除DPPH自由基及其還原能力要顯著強(qiáng)于V<,C>。 研究了洋蟲成蟲蛋白酶解液的抗衰老作用。結(jié)果表明，同衰老模型組相比，洋蟲成蟲蛋白酶解液中劑量、高劑量試驗(yàn)組小鼠肝中超氧化物歧化酶(SOD)活性差異均達(dá)到了顯著水平，其中以中劑量組為最佳，達(dá)到了極顯著