吖啶酯化學(xué)發(fā)光免疫分析方法用于HIV-1p24抗原檢測的研究.pdf

1、自HIV病毒被發(fā)現(xiàn)以來，艾滋病在全球范圍內(nèi)的傳播趨勢日益嚴(yán)重，為科研和預(yù)防工作提出了嚴(yán)峻的考驗。HIV-1 p24抗原的高靈敏度檢測，在過去的十幾年里得到了不斷的改進(jìn)和提高，并作為縮短窗口期、提高檢測靈敏度的檢測體系引入到了第四代抗體檢測方法中去，為艾滋病的預(yù)防和檢驗，病毒感染情況的監(jiān)測，艾滋病患者病情的控制及用藥的效果研究都起到了應(yīng)有的重要作用。 本課題將化學(xué)發(fā)光體系引入到p24抗原檢測方法中來，以吖啶酯作為發(fā)光試劑，以雙抗夾

2、心法為原理，建立HIV-1 p24抗原的化學(xué)發(fā)光免疫分析方法。將檢測靈敏度提高到fg級的水平；具有反應(yīng)時間短，靈敏度高，操作簡單，費用低廉，不影響抗原抗體生物學(xué)活性等優(yōu)點。對于HIV-1 p24抗原檢測方法的改進(jìn)有很好的理論和實際意義。 本課題將吖啶酯作為化學(xué)發(fā)光試劑對抗p24抗體進(jìn)行直接標(biāo)記，標(biāo)記比率為1.46。標(biāo)記吖啶酯的抗體作為檢測抗體同包被抗體一起組成了雙抗夾心抗原檢測體系，建立了基于吖啶酯標(biāo)記抗體的p24抗原化學(xué)發(fā)光免

3、疫分析方法。 為了進(jìn)一步優(yōu)化實驗，本課題設(shè)計了一系列正交實驗，對封閉蛋白及Tween-20去污劑的應(yīng)用進(jìn)行了深入的研究。其中，以牛血清白蛋白同酪蛋白進(jìn)行比較，前者的封閉效果更為理想；在分析緩沖液中加入封閉蛋白將有利于減少非特異性信號；分析緩沖液中加入Tween-20，但在第三次洗滌的緩沖液中不加入Tween-20有利于較高信噪比。 此后，我們從方法學(xué)的角度對該方法進(jìn)行了分析靈敏度、功能靈敏度、檢測寬度等多方面的評價，并同

4、常用的酶聯(lián)免疫分析方法進(jìn)行了比較。HIV-1 p24抗原吖啶酯化學(xué)發(fā)光免疫分析方法的功能靈敏度為0.5pg/ml，比普通的ELISA方法低1-2個數(shù)量級；分析靈敏度為0.5pg/ml；線性范圍在0.5 pg/ml-100ng/ml，比普通的ELISA方法高1-2個數(shù)量級；HIV-1 p24抗原吖啶酯化學(xué)發(fā)光免疫分析方法與普通的ELISA檢測方法具有很好的相關(guān)性，在P≤0.01情況下，相關(guān)系數(shù)為0.951。 同時，以HIV-1 p