骨髓干細(xì)胞在腎小球硬化微環(huán)境中的分化.pdf

1、目的：通過研究骨髓干細(xì)胞在腎小球硬化病理微環(huán)境下的分化，探討腎臟病慢性進(jìn)展及腎小球硬化的機(jī)制。
　　 方法：80只C57BL/6雌性小鼠放療骨髓清空后移植入雄性EGFP轉(zhuǎn)基因的C57BL/6小鼠骨髓干細(xì)胞，骨髓重建，4周后隨機(jī)分為兩個組：(1)骨髓移植+腎小球硬化組(BMSC+GS組)：左腎切除，術(shù)后7天、28天阿霉素尾靜脈注射(劑量分別為5mg/kg及3mg/kg)建立腎小球硬化模型；(2)骨髓移植+假手術(shù)組(BMSC+Sha

2、m組)：行假手術(shù)，術(shù)后7天、28天以等容積生理鹽水代替阿霉素注射。C57BL/6雌性小鼠8只為正常對照組(Control組)。在術(shù)后第2、4、8、12、16周骨髓移植兩組隨機(jī)取8只動物處死，第16周Control組全部處死。各組各時間點檢測以下指標(biāo)：(1)尿蛋白、血尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)；(2)光鏡腎臟病理改變；(3)石蠟切片免疫組化及冰凍切片熒光顯微鏡檢測EGFP陽性細(xì)胞在腎組織中的定位；(4)免疫熒光雙標(biāo)激光共聚焦顯微鏡觀察

3、EGFP陽性細(xì)胞的位置和形態(tài)，了解骨髓干細(xì)胞分化為腎實質(zhì)細(xì)胞的情況；觀察EGFP*/α-SMA+細(xì)胞，了解骨髓干細(xì)胞是否分化為基質(zhì)分泌細(xì)胞。
　　 結(jié)果：(1)尿蛋白：Control組和BMSC+Sham組各時間點均為陰性，BMSC+GS組第2周始出現(xiàn)弱陽性，隨時間延長，漸轉(zhuǎn)為陽性；血BUN和Cr：Control與BMSC+Sham組各時間點無明顯變化(p＞0.05)，BMSC+GS組第2周出現(xiàn)升高，至16周時達(dá)到最高，各時間點

4、與Control組和BMSC+Sham組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(p＜0.05)；(2)腎臟病理：HE、PAS染色Control組和BMSC+Sham組各時間點無明顯改變，BMSC+GS組第4周出現(xiàn)系膜增生，第12至16周局灶節(jié)段性腎小球硬化成模；(3)免疫組化及熒光EGFP檢測：BMSC+Sham組各個時間點腎小球和腎小管間質(zhì)部位均可見少量表達(dá)。BMSC+GS組第2周和第4周主要表達(dá)于腎小球區(qū)，隨著時間的推移，腎小球區(qū)減少，腎小管間質(zhì)區(qū)增多；