骨髓細胞在小鼠實驗性腎小球腎炎中的作用.pdf

1、目的：本研究旨在觀察骨髓細胞是否可以分化成為竹葉青蛇毒導致的系膜增生型腎小球腎炎小鼠中的腎小球細胞，同時觀察中藥川芎嗪和GM-CSF，促進骨髓細胞增殖因素，對骨髓細胞向腎小球細胞分化的影響。 方法：綠色熒光蛋白(GFP)標記的C57BL/6轉(zhuǎn)基因小鼠提供骨髓，同種無熒光標記的普通C57BL/6小鼠隨機分為6組：①正常對照組：小鼠不進行任何處理，提供正常小鼠的各種參考值及進行腎臟組織的各種對照。②骨髓移植組：受體鼠在<'60>Co

2、全身均勻照射后六小時內(nèi)接受供體的GFP標記的骨髓細胞，五周后觀察受體鼠的血常規(guī)及進行其骨髓細胞的流式細胞儀檢測，以明確受體鼠的骨髓重建是否成功。③骨髓移植+竹葉青蛇毒組：受體鼠在接受骨髓移植后的五周通過尾靜脈注射竹葉青蛇毒誘發(fā)系膜增生型腎小球腎炎，竹葉青蛇毒注射后的第7、14、28、56天觀察受體鼠腎臟中的綠色熒光。④骨髓移植+竹葉青蛇毒+GM-CSF組：骨髓移植后的受體鼠在竹葉青蛇毒注射后連續(xù)腹腔注射GM-CSF一周，在上述各時間點觀

3、察腎臟組織中的綠色熒光。⑤骨髓移植+竹葉青蛇毒+川芎嗪組：骨髓移植后的受體鼠在竹葉青蛇毒注射后連續(xù)腹腔注射川芎嗪一周，在上述各時間點觀察腎臟組織中的綠色熒光。⑥骨髓移植+竹葉青蛇毒+GM-CSF+川芎嗪組：骨髓移植后的受體鼠在竹葉青蛇毒注射后連續(xù)腹腔注射GM-CSF及川芎嗪一周，在上述各時間點觀察。腎臟組織中的綠色熒光。以上各組中小鼠分別在不同時間點取腎，制備冰凍切片和石蠟切片，并采用免疫熒光組織化學雙標和免疫組織化學等方法在激光共聚焦

4、顯微鏡和光鏡下觀察受體鼠腎臟中綠色熒光的的分布、數(shù)量和進一步鑒別其細胞類型。 結果： <'60>Co全身均勻照射后進行骨髓細胞移植的骨髓移植組小鼠的活動與飲食與正常小鼠無明顯差別，只是毛發(fā)漸變灰白，五周后其血常規(guī)與正常鼠相較無明顯差異，流式細胞儀檢測顯示其骨髓細胞中GFP陽性細胞的比例也達到59.62±13.21％，提示骨髓重建成功。在熒光顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡下觀察不同組受體鼠不同時間的腎臟組織的冰凍切片，發(fā)現(xiàn)：②、③組受體

5、鼠腎小球內(nèi)在不同時間點均未見到綠色熒光，但個別腎小管處有少量綠色熒光；④、⑤、⑥組受體鼠在不同時間點時其腎小球內(nèi)均可見到少量綠色熒光，且似乎⑥組受體鼠腎小球內(nèi)的綠色熒光較多。GFP免疫組織化學的結果與上述相同，個別腎小管上皮細胞和腎小球內(nèi)少量細胞呈胞質(zhì)棕褐，核大紫藍色，似乎為外源性GFP陽性細胞。為了進一步鑒別受體鼠腎小球內(nèi)GFP陽性細胞的種類，進行了免疫熒光組織化學雙染色，結果顯示：④、⑤、⑥組受體鼠腎小球內(nèi)的GFP陽性細胞可能是腎小