GALANTIDE對(duì)治療小鼠急性胰腺炎的機(jī)制研究.pdf

1、目的
　　探討甘丙肽受體拮抗劑GALANTIDE對(duì)蛙皮素誘導(dǎo)小鼠急性胰腺炎過(guò)程中不同時(shí)間點(diǎn)IL-1、IL-10等炎癥介質(zhì)的調(diào)節(jié)作用。
　　材料與方法
　　128只健康雄性的K-M小鼠，隨機(jī)將其分為4組，①生理鹽水對(duì)照組(NS組);②急性胰腺炎模型組（AP組）;③復(fù)制急性胰腺炎模型后，使用甘丙肽受體拮抗劑治療組（AP+GT組）;④甘丙肽受體拮抗劑對(duì)照組（GT組），每組又分為給藥后3h、6h、12h及24h共4個(gè)亞組，每組

2、8只，各組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前禁食12h，不禁水。AP組小鼠經(jīng)腹腔注射蛙皮素50ug/kg/次，每隔1h一次，共7次，誘導(dǎo)急性胰腺炎模型。NS組小鼠經(jīng)腹腔注射生理鹽水10mL/kg/次，每隔1h一次，共7次，作為安慰劑對(duì)照組。AP+GT組小鼠于誘導(dǎo)急性胰腺炎模型的同時(shí)給予經(jīng)腹腔注射甘丙肽受體拮抗劑Galantide，66ug/kg/次，每隔1h一次，一共14次。GT組小鼠經(jīng)腹腔注射甘丙肽受體拮抗劑Galantide，66ug／kg/次，每隔1h一

3、次，共7次，作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照組。各組小鼠于最后一次給藥后3h、6h、12h、24h使用10％水合氯醛麻醉，經(jīng)心臟采血收集標(biāo)本，使用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清淀粉酶(AMY)水平，雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)血清IL-1、IL-10含量。剖腹，收集胰腺標(biāo)本，檢測(cè)胰腺組織中髓過(guò)氧化物酶(MPO)的含量，并取部分胰腺組織行蘇木素-伊紅染色（H-E染色）進(jìn)行組織病理學(xué)評(píng)分。
　　結(jié)果
　　1.血清淀粉酶的變化:血清淀粉酶水平在NS組及GT組組內(nèi)

4、各個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。AP組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)比較，血清淀粉酶水平于給藥后12h達(dá)到高峰，24h有所下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。AP組與NS組、GT組在各相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)上相比，血清淀粉酶水平均較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。AP+GT組與AP組在各對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)上相比血清淀粉酶水平明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.胰腺組織髓過(guò)氧化物酶的變化:胰腺組織中髓過(guò)氧化物酶水平在NS組及G

5、T組組內(nèi)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)比較無(wú)明顯差異(P＞0.05)。AP組與AP+GT組組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)比較胰腺組織中髓過(guò)氧化物酶水平于12h達(dá)到高峰，24h有所下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。AP組與NS組、GT組在各對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)上相比，胰腺組織中髓過(guò)氧化物酶的水平均較高，并且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。AP+GT組與AP組在各相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)上相比，胰腺組織中髓過(guò)氧化物酶的水平明顯下降，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.血清炎癥

6、因子IL-1的變化:血清炎癥因子IL-1在各組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)間無(wú)明顯差別(P＞0.05)。AP組、AP+GT組與NS組、GT組在給藥后各時(shí)間點(diǎn)相比，血清炎癥因子IL-1水平均較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);GT組與NS組在給藥后各時(shí)間點(diǎn)相比，血清炎癥因子IL-1水平也稍高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);AP+GT組與AP組在給藥后各時(shí)間點(diǎn)相比，血清炎癥因子IL-1水平無(wú)明顯變化。
　　4.血清抗炎癥因子IL-10的變化:

7、血清抗炎癥因子IL-10在NS組與GT組組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)間無(wú)明顯差別(P＞0.05)。AP組與AP+GT組血清抗炎癥因子IL-10均隨著時(shí)間點(diǎn)延長(zhǎng)而升高，并于給藥后24h達(dá)到高峰，各時(shí)間點(diǎn)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。AP+GT組與其余各組在各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)上比較，血清抗炎癥因子IL-10均較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　5.胰腺組織肉眼及鏡下變化:NS組及GT組小鼠各時(shí)間點(diǎn)無(wú)論肉眼還是鏡下均未見(jiàn)明顯異常。AP組小鼠肉

8、眼觀在3h時(shí)，可見(jiàn)少量腹水，胰腺組織的顏色蒼白，體積有所增大，胰腺出血點(diǎn)較少;6h上述改變更加明顯，可見(jiàn)小腸擴(kuò)張，充血水腫，胰腺點(diǎn)狀出血有所增多;12h可見(jiàn)腹腔淡紅色腹水，小腸內(nèi)積液，胰腺組織水腫;24h可見(jiàn)腹腔大量血性腹水，胰腺更加腫脹，并且與周圍組織相互粘連，小腸內(nèi)有大量液體積聚。AP組小鼠鏡下觀在給藥后3h就可見(jiàn)胰腺組織間質(zhì)水腫，輕度組織結(jié)構(gòu)紊亂，胰腺間質(zhì)及血管周圍有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，但小葉的結(jié)構(gòu)基本清晰。6h時(shí)上述改變有所加重。

9、12h及24h時(shí)，胰腺組織結(jié)構(gòu)嚴(yán)重紊亂，幾乎消失，胰腺組織周圍有大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。AP+GT組小鼠肉眼觀各時(shí)間點(diǎn)小腸擴(kuò)張情況、充血、水腫程度，胰腺水腫、出血斑均較AP組輕;鏡下觀胰腺組織的間質(zhì)水腫程度、胰腺小葉的壞死范圍及炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)程度也較AP組輕。
　　6.胰腺組織的病理學(xué)評(píng)分變化:胰腺組織損傷的病理學(xué)評(píng)分在NS組及GT組組內(nèi)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)間無(wú)明顯差別（P＞0.05）。AP組與AP+GT組組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)比較，胰腺組織損傷的病理學(xué)評(píng)

10、分于給藥后12h最高，與3h和6h相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，24h與12h相比，雖然評(píng)分有所下降，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。AP組與NS組、GT組在各對(duì)應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)上相比，胰腺組織損傷的病理學(xué)評(píng)分均較高，并且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，AP+GT組與AP組在各對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)上相比均較低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論
　　1.蛙皮素腹腔注射成功建立了小鼠急性胰腺炎(AP)模型;