萘乙酸對小鼠肝細(xì)胞增殖與凋亡的影響研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗采用體外細(xì)胞培養(yǎng)和動物實(shí)驗的方法，觀測萘乙酸對肝細(xì)胞增殖活性、PCNA、Caspase-3、Bcl-2、血清丙二醛含量、血清谷胱甘肽過氧化物酶活性、小鼠體重、肝臟體重比等指標(biāo)，探討萘乙酸對肝細(xì)胞增殖與凋亡作用和對小鼠抗氧化能力的影響。
　　 方法：
　　 1、體外實(shí)驗：將正常小鼠肝臟勻漿后制成肝臟細(xì)胞懸液，分別加入濃度為Olμmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/

2、L、400μmol/L的萘乙酸培養(yǎng)24h，用MTT法測定肝細(xì)胞增殖活性；取肝細(xì)胞細(xì)胞懸液分為正常對照組、50μmol/LNAA組和100μmol/LNAA組，培養(yǎng)3、6、12、24、48h，用MTT法測定細(xì)胞增殖活性。
　　 2、體內(nèi)實(shí)驗：體重18～20g健康昆明小鼠50只，雌雄各半，于本實(shí)驗室適應(yīng)性喂養(yǎng)5天后，采用完全隨機(jī)分組的方法，將實(shí)驗動物分為正常對照組，高、中、低劑量組和陽性對照組共5個組，每組10只，雌雄各半。高、中、

3、低劑量組動物飼料中加入萘乙酸的劑量分別為5000mg/kg、l000mg/kg和200mg/kg；正常對照組和陽性對照組喂飼普通飼料；陽性對照組于實(shí)驗結(jié)束前3天，每天腹腔注射環(huán)磷酰胺20mg/kg-次。各組動物均自由進(jìn)食、飲水，實(shí)驗周期為4個周，眼球取血處死小鼠。用MTT法檢測肝細(xì)胞增殖活性，用免疫組化的方法檢測肝組織的PCNA、Bcl-2和Caspase-3表達(dá)水平，分光光度法測定血清丙二醛含量和谷胱甘肽過氧化物酶活性，用天平稱小鼠體

4、重和肝臟重量等指標(biāo)。
　　 結(jié)果：
　　 1、體外實(shí)驗結(jié)果：肝細(xì)胞體外培養(yǎng)24h，lOOμmol/L劑量組和正常對照組肝細(xì)胞增殖活性分別為0.874±0.004和1.071±0.004，差異有顯著性意義(P<0.O5)。在同一作用時間點(diǎn)，隨著NAA劑量的增加，50、100、200、400μmol/LNAA組的肝細(xì)胞增殖活性依次降低。隨著作用時間的延長50、lOOμmol/LNAA組的肝細(xì)胞增殖活性逐漸降低。結(jié)果表明NAA

5、對肝細(xì)胞的增殖活性有抑制作用。
　　 2、體內(nèi)實(shí)驗結(jié)果：
　　 (1)肝細(xì)胞增殖水平：高劑量組和正常對照組的肝細(xì)胞增殖活性分別為0.794±0.019和1.055±0.019，差別有顯著性意義(P<0.05)。高劑量NAA組PCNA陽性表達(dá)率為11.2％，正常對照組為33.1％，經(jīng)檢驗，差異均有顯著性(P<0.05)。
　　 (2)肝細(xì)胞凋亡水平：高、中劑量NAA組Caspase-3陽性表達(dá)率分別為37.9％和8

6、.2％，正常對照組為6.3％，經(jīng)檢驗，差異均有顯著性(P<0.05)。高劑量組和正常對照組Bcl-2陽性表達(dá)率分別為12.1％和31.9％，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 (3)血清MDA和GSH-Px水平：丙二醛含量高劑量組和正常對照組分別為12.19±0.24nmol/ml和9.17±0.17nmol/ml，谷胱甘肽過氧化物酶含量高劑量組和正常對照組分別為798.95±10.61NU/ml和1190.20±14.7

7、8NU/ml，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 (4)體重和肝臟體重比：實(shí)驗28天后，各劑量組小鼠體重與對照組相比均有所降低，高、中劑量組小鼠體重分別為14.96±0.83和31.48±1.19，與正常對照組相比差異有顯著性(P<0.05)。高劑量組和正常對照組肝臟體重比分別為117.73±5.36和48.18±5.39，差別有顯著性意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1、萘乙酸對小鼠肝細(xì)胞增殖活