人宮頸鱗狀上皮永生化細胞和癌細胞的核蛋白質組及微管蛋白比較分析.pdf

1、目的：對比分析HPVl6陽性的人宮頸鱗狀上皮永生化細胞(H8細胞株)和宮頸癌細胞(Caski細胞株)核蛋白質組和骨架蛋白α、β、γ-微管蛋白的表達籌異，識別并鑒定核蛋白質組差異表達的蛋白質，為宮頸癌癌變機制和抗癌藥物靶點的選擇提供亞細胞層面的信息。 方法：①采用MERCK公司亞細胞結構蛋白質提取試劑盒Calbiochem(R)分步提取H8細胞和Caski細胞的核蛋白和骨架蛋白。②利用固相pH梯度(immobilized pH g

2、radient，IPG)雙向凝膠電泳(2-dimensronai gel electrophoresis，2-DE)分別獲得兩株細胞的核蛋白雙向電泳圖譜，圖像分析篩選差異表達蛋白斑點，MALDI-TOF-MS鑒定蛋白質。③采用免疫細胞化學SP法檢測α、β-微管蛋白在H8細胞和Caski細胞中的表達差異，并用Western blotting對骨架蛋白α、β、γ-微管蛋白在兩株細胞中的表達水平進行半定量分析。 結果：①從H8細胞和C

3、aski細胞的細胞核蛋白2-DE圖譜中篩選出30個候選籌異表達的蛋白質斑點，質譜鑒定出9個差異表達的蛋白質，其中6個(INT6、TRAl6、PP4C、CDK6、ANRl6、ZN211)在Caski中高表達，3個(MYSTI、LMNA、TIAFl)在Caski細胞中低表達。②Caski細胞巾α、β-微管蛋白表達水平高于H8細胞，差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。半定量分析α、β、γ-微管蛋白，在Caski細胞中的表達量高于H8細胞(P＜

4、0.05)。 結論：①人宮頸鱗狀上皮永生化細胞(H8)和宮頸癌細胞(Caski)核蛋白質組差異表達分析，篩選出TIAF1、TRAl6、PP4C、CDK6、.ANRl6、ZN211 6個蛋白在Caski細胞核高表達，MYST1、INT6、LMNA3個蛋白在Caski細胞核低表達。它們可能通過加速細胞周期、促進中心體成熟和細胞核分裂、信號轉導、轉錄調(diào)控、抗凋亡等途徑促進癌細胞的轉化與增殖。這9個蛋白可能成為宮頸癌新的標記物或者治療靶

5、點，為宮頸癌及癌前病變的診斷提供幫助。②微管蛋白是真核細胞中普遍存在的結構，中心體異常和染色體不穩(wěn)定是腫瘤細胞的普遍特征，中心體微管蛋白較其他功能微管蛋白隨細胞周期變化活躍。目前尚無提純中心體的成熟技術，我們通過免疫組化和免疫印跡用α、β、γ-微管蛋白的表達來推測中心體的表達情況，探討中心體蛋白水平異常在宮頸癌發(fā)生發(fā)展中的意義，結果顯示Caski細胞的α、β、γ-微管蛋白的表達量顯著高于H8細胞，即癌細胞的中心體數(shù)目多、PCM過多聚集，