定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析卵巢癌細(xì)胞高轉(zhuǎn)移的機(jī)制.pdf

1、在女性生殖器官惡性腫瘤中，卵巢發(fā)病率排名第三，死亡率占首位。其中，遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移是卵巢上皮癌高復(fù)發(fā)率和高死亡率的重要原因之一。研究卵巢癌的轉(zhuǎn)移機(jī)制可以幫助我們對(duì)卵巢癌進(jìn)行靶點(diǎn)治療和預(yù)后評(píng)估，提高患者生存率。
　　蛋白質(zhì)組學(xué)本質(zhì)上是通過在大規(guī)模水平上研究蛋白質(zhì)的特征，從而獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生、細(xì)胞代謝等過程的全面整體的認(rèn)識(shí)。質(zhì)譜技術(shù)是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中最重要的鑒定技術(shù)，其基本原理是樣品分子離子化后，根據(jù)不同離子的質(zhì)荷比(m/z)差

2、異來分離離子并確定分子量。
　　我們以人卵巢癌細(xì)胞HO-8910細(xì)胞及其高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系HO-8910 PM為研究對(duì)象，通過劃痕實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)HO-8910 PM細(xì)胞遷移速度變快、細(xì)胞增殖變快。因此，運(yùn)用定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法，研究HO-8910 PM和HO-8910細(xì)胞系間蛋白質(zhì)表達(dá)的區(qū)別，從而闡明HO-8910 PM細(xì)胞轉(zhuǎn)移增強(qiáng)的機(jī)制。收取對(duì)數(shù)期HO-8910及HO-8910 PM細(xì)胞，全蛋白裂解后，進(jìn)行SDS聚丙烯酰胺凝膠

3、電泳，用考馬斯亮藍(lán)染色，脫色后用胰酶將膠粒中的蛋白質(zhì)酶解成肽段。將肽段萃取出并用等重同位素標(biāo)記試劑TMT進(jìn)行標(biāo)記，除鹽后用質(zhì)譜儀進(jìn)行分析。質(zhì)譜數(shù)據(jù)用Proteome Discoverer Searching Algorithm(version1.3)搜索UniprotHuman數(shù)據(jù)庫進(jìn)行分析，得到的Uniprot Accession使用DAVID等在線軟件進(jìn)行信號(hào)通路的匹配和分析。選取變化明顯的信號(hào)通路的相關(guān)蛋白進(jìn)行qPCR和Weste

4、rn blotting驗(yàn)證。
　　結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)，在HO-8910 PM中有664種蛋白表達(dá)量升高，涉及核糖體組成、細(xì)胞骨架、細(xì)胞黏附、吞噬作用、細(xì)胞內(nèi)吞、糖酵解及丙酮酸代謝等通路。我們發(fā)現(xiàn)在HO-8910 PM細(xì)胞系中，和上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化(EMT)過程相關(guān)蛋白S100A4，波形蛋白高表達(dá)，證明HO-8910 PM細(xì)胞系EMT過程加強(qiáng)。在組學(xué)數(shù)據(jù)中我們發(fā)現(xiàn)HO-8910 PM中膜聯(lián)蛋白A3，CDK5、Arf6和RAS等相關(guān)蛋白