急性肝損傷與髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體-1基因及蛋白表達(dá)的關(guān)系.pdf

1、[目的]
　　 建立刀豆蛋白A(Concanavaiin A,ConA)誘導(dǎo)的急性免疫性肝損傷模型,通過(guò)檢測(cè)小鼠急性肝損傷時(shí)肝臟表達(dá)髓樣細(xì)胞觸發(fā)受體-1(Triggering receptor expressedon myeloid cells-1,TREM-1)的情況,來(lái)分析TREM-1與急性肝損傷之間的關(guān)系,了解其在急性肝損傷中的作用機(jī)制,并為急性肝損傷尋找有效的臨床檢測(cè)方法提供理論依據(jù)。
　　 [方法]
　　

2、 將40只昆明小鼠隨機(jī)分為兩大組,正常對(duì)照組10只,模型組共30只(2h組、8h組、16h組各10只)。模型組小鼠經(jīng)尾靜脈一次性注入ConA(20mg/kg)復(fù)制急性肝損傷模型;正常對(duì)照組在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)尾靜脈注射同等體積的生理鹽水。各組小鼠均于ConA注射后2h、8h、16h分別摘眼球取血,分離血清,用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransfemse,ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate

3、aminotransfemse,AST)含量。小鼠低溫處死后取肝臟,用PCR法檢測(cè)肝組織TREM-1mRNA及腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor)mRNA含量,WESTERN(蛋白免疫印跡)檢測(cè)肝組織TREM-1蛋白含量;HE染色法觀察肝組織病理變化。
　　 [結(jié)果]
　　 1.ConA引發(fā)明顯的肝細(xì)胞損傷,小鼠血清ALT、AST含量2h組分別為(134.65±43.87U/L;184.26±7

4、1.50U/L)高于正常組(29.46±3.26U/L:75.65±11.34U/L)(P＜0.05);8h組(267.54±75.41U/L;316.65±86.68U/L)和16h組(254.68±61.92U/L;298.68±67.63U/L)較正常組均顯著升高(P＜0.05)。模型組兩兩比較,P均＜0.05;但8h組升高最明顯。
　　 2.組織形態(tài)學(xué)觀察,與正常組比較,16小時(shí)組肝細(xì)胞變性壞死程度明顯加重,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)

5、增多。
　　 3.肝組織中TREM-1mRNA水平,2h組(0.208±0.014)ng/ml、8h組(0.622±0.027)ng/ml、16h組(0.419±0.011)ng/ml均較正常組(0.124±0.028)ng/ml顯著升高(P＜0.05);模型組兩兩比較,差異有顯著性(P＜0.05);以8h組升高最明顯。
　　 4.肝組織中TREM-1蛋白水平,2h組(71.83±4.52)ng/ml、8h組(104.5

6、0±13.94)ng/ml、16h組(84.55±17.99)ng/ml與正常組(46.68±12.57)ng/ml比較,均較正常組明顯升高(P＜0.05):模型組兩兩比較,有顯著性差異(P＜0.05);以8h組升高最明顯。
　　 5.肝組織中TNF-α水平,2h組(0.378±0.200)pg/ml、8h組(0.661±0.027)pg/ml、16h組(0.693±0.170)pg/ml與正常組(0.219±0.039)pg/

7、ml比較,差異有顯著性(P＜0.05);2h組與8h組及16h組比較,差異有顯著性(P＜0.05),8h組與16h組比較差異無(wú)顯著性(P＞0.05),以16h組升高最明顯。
　　 [結(jié)論]
　　 正常情況下:肝組織未見(jiàn)TREM-1的表達(dá),但在ConA誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷時(shí),TREM-1表達(dá)明顯增加。其可能機(jī)制為:TREM-1可激發(fā)炎癥反應(yīng),刺激中性粒細(xì)胞脫顆粒,激活TNF-α等炎癥前化學(xué)增活素的分泌,使肝臟病變加重,可能