治療阿爾茲海默病的新型內(nèi)源性大麻素類似物N-硬脂酰酪氨酸鹽成藥性研究.pdf

1、阿爾茲海默?。ˋlzheimer’s disease，AD）又名老年性癡呆，是一種常見于老年人群的原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，AD遞進性地危害老年人認知能力，直至病人因最終喪失自理能力而死亡?，F(xiàn)臨床針對AD的治療藥物多具有嚴重的不良反應(yīng)或毒副作用，且治療效果不佳。因而開發(fā)新型的防治AD的藥物已成為當(dāng)務(wù)之急。N-花生四烯酰乙醇胺(AEA)是最早報道的內(nèi)源性大麻素，具有廣泛的生理作用，可有效干預(yù)多種退行性神經(jīng)疾病進程的多個環(huán)節(jié)，具有神經(jīng)保護

2、作用。但AEA被證明不宜直接藥用。
　　N-硬脂酰酪氨酸(N-stearoyltyrosine，NsTyr)是擬AEA的長鏈脂肪酰氨基酸，體內(nèi)外活性實驗證明，NsTyr能有效對抗多種藥理模型的神經(jīng)損傷（大鼠腦片缺氧缺糖損傷、原代神經(jīng)細胞谷氨酸損傷、PC12細胞氧化應(yīng)激損傷模型和沙土鼠慢性低灌注、急性全腦缺血再灌注模型等），其神經(jīng)保護作用呈現(xiàn)劑量依賴性。針對具有良好應(yīng)用前景的該治療AD藥物的候選化合物進行的成藥性研究包括：藥物合成路

3、線優(yōu)化、理化性質(zhì)研究、穩(wěn)定性測評等臨床前藥學(xué)研究、藥物代謝動力學(xué)研究及體外安全性評估等，對NsTyr的深度研發(fā)具有重要的應(yīng)用價值。
　　本文首次報道了百克級NsTyr鹽的合成方法及工藝；并確立了體內(nèi)、體外檢測樣品中NsTyr及其鹽的高效液相色譜檢測方法。該方法具有操作便捷、靈敏度高、專屬性強，成本低廉等特點，并已應(yīng)用于NsTyr及其鹽的理化性質(zhì)評估，穩(wěn)定性測評、藥物代謝動力學(xué)研究等。本文還開展了細胞毒性、遺傳毒性、心臟毒性及生殖毒

4、性實驗等安全性評估實驗。根據(jù)上述合安全性評估實驗結(jié)果和早期急性毒性實驗結(jié)果還對NsTyr及其鹽做了用藥安全及其治療窗口的評估。
　　本文建立的檢測方法所涉及的各項檢測指標(biāo)均通過方法學(xué)驗證，可滿足體內(nèi)外樣品中NsTyr及其鹽的定量分析要求。通過比較NsTyr及其鹽各項檢測指標(biāo)，我們證明NsTyr鹽的理化性質(zhì)及藥動學(xué)性質(zhì)上較原型藥物有明顯的改善，研究表明 NsTyr在水中的溶解度為27.62±0.43 mg/L、其二鉀鹽 NsTyr-

5、2K、二鈉鹽NsTyr-2Na的溶解度分別提高至51.70±0.29 mg/L和92.65±0.52 mg/L；NsTyr與NsTyr-2K的血漿蛋白結(jié)合率分別為22.79％±3.26%、38.46%±4.58%；主要藥動學(xué)參數(shù)達峰時間Tmax分別為0.75±0.24 h、0.60±0.17 h，峰濃度Cmax分別為0.11±0.48μg/ml、2.40±0.33μg/ml，半衰期T1/2分別為1.49±0.96 h、2.90±0.75

6、 h，72小時內(nèi)曲線下面積AUC0-72分別為0.13±0.09μg*h/ml、3.49±0.61μg*h/ml。毒性評估實驗表明，NsTyr及其鹽在正常人肝細胞Chang liver cell的IC50為62μmol/L，且對細胞增殖的抑制作用與時間無關(guān)。生殖毒性實驗中，自然染毒的SD大鼠及器官的各項生理指標(biāo)（體重、臟器系數(shù)，精子及卵巢功能等）表明NsTyr及其鹽對大鼠生殖無生殖毒性。遺傳毒性Ames實驗中NsTyr及其鹽對平皿中菌斑

7、無明顯抑制作用，表明該化合物無導(dǎo)致生物體遺傳物質(zhì)發(fā)生畸變的不良作用。心臟毒性實驗中未觀察到明顯轉(zhuǎn)染hERG鉀離子通道的CHO細胞出現(xiàn)hERG阻斷或QT間期延長，推測該類化合物無誘發(fā)室性心動過速的毒性作用。
　　綜上所述，本文從臨床前藥學(xué)研究、藥物代謝動力學(xué)研究及早期安全性評估三個方面對NsTyr及其鹽進行系統(tǒng)的成藥性研究，證明NsTyr鹽較其原型的理化常數(shù)及藥動學(xué)參數(shù)等性質(zhì)上改善，使前者成為安全性高，同時兼具良好成藥性質(zhì)和生物活性