多烯磷脂酰膽堿對(duì)于阿爾茨海默病治療作用的研究.pdf

1、阿爾茨海默?。ˋlzheimer’sDisease,AD）是導(dǎo)致老年人發(fā)生癡呆最常見的原因。它是指發(fā)生在老年期及老年前期的一種原發(fā)性退行性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，它是一種持續(xù)性的高級(jí)神經(jīng)功能活動(dòng)障礙，即在沒有意識(shí)障礙的狀態(tài)下，記憶、思維、分析判斷、視空間辨認(rèn)、情緒等方面的障礙。隨著研究的進(jìn)展，我們明確知道AD的標(biāo)志性分子病理機(jī)制，即由β-淀粉樣蛋白（β-amyloid,Aβ）組成的斑塊和由過度磷酸化的Tau蛋白組成的纖維纏結(jié)。并且腦內(nèi)Aβ斑塊的數(shù)

2、量與癡呆程度有密切關(guān)系。到目前為止，對(duì)于AD所致認(rèn)知功能障礙的治療主要局限于改善癥狀及延緩疾病進(jìn)程，尚無有效的藥物能夠大幅度提高認(rèn)知功能及逆轉(zhuǎn)疾病進(jìn)程。
　　用Aβ海馬注射造成Aβ沉積的AD模型在一定程度上模擬了AD的病理改變,即與神經(jīng)元相關(guān)的Aβ沉積，且出現(xiàn)了以記憶功能障礙為主的認(rèn)知功能障礙。該模型對(duì)于AD的致病機(jī)制研究及尋求AD治療方法及藥物做出了巨大貢獻(xiàn)。多烯磷脂酰膽堿(PolyenePhosphatidylCholine,

3、PPC)是目前臨床上常用的肝病輔助治療藥物，它是指卵磷脂結(jié)構(gòu)中的甘油三酯骨架上不飽和脂肪酸鍵連接了二十二碳六烯酸(docosahexaenoicacid，DHA)和花生四烯酸（arachidonicacid，AA）的磷脂酰膽堿。研究表明DHA對(duì)于Aβ毒性及Tau蛋白的磷酸化都有保護(hù)作用；AA對(duì)于衰老大鼠海馬神經(jīng)元的細(xì)胞膜的流動(dòng)性具有保護(hù)作用，且有利于增加神經(jīng)突觸的可塑性。
　　基于以上的背景，本研究制備了AD大鼠模型，應(yīng)用多烯磷脂

4、酰膽堿進(jìn)行治療，通過水迷宮實(shí)驗(yàn)觀察多烯磷脂酰膽堿對(duì)于AD模型大鼠的認(rèn)知行為學(xué)改變的影響；并通過形態(tài)學(xué)及免疫組化染色觀察多烯磷脂酰膽堿對(duì)AD模型大鼠腦內(nèi)形態(tài)學(xué)改變、Aβ含量、膠質(zhì)細(xì)胞活化和突觸結(jié)構(gòu)改變的影響。進(jìn)而評(píng)價(jià)其治療作用及可能的治療機(jī)制。為探討多烯磷脂酰膽堿對(duì)于AD的治療作用提供理論依據(jù)。
　　主要結(jié)果如下：
　　一、Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)行為學(xué)改變①定位航行實(shí)驗(yàn)（記憶訓(xùn)練測試）：通過從四個(gè)象限位置找到隱匿于水面下平臺(tái)的

5、時(shí)間來評(píng)價(jià)。PPC處理改善了Aβ灌注模型大鼠的記憶獲取能力。②空間探索實(shí)驗(yàn)（記憶保留測試）：通過對(duì)在曾經(jīng)放置平臺(tái)的象限內(nèi)游泳時(shí)間和游程分析來評(píng)價(jià)各組大鼠的空間探索能力。PPC處理Aβ模型大鼠可以改善其被損傷后記憶保留能力的降低。
　　二、海馬組織的尼氏形態(tài)學(xué)染色與正常對(duì)照組、假手術(shù)組比較，模型組針道處及灌注部位均顯示有明顯的尼氏體數(shù)量增加，并有明顯的神經(jīng)元缺失；PPC處理組與模型組比較，針道處及灌注部位尼氏體的數(shù)量明顯減少，神經(jīng)元

6、缺失數(shù)量明顯減少。對(duì)各組選定區(qū)域尼氏體數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，與模型組比較，PPC處理組針道處及灌注部位尼氏體的數(shù)量明顯減少；與正常對(duì)照組比較，PPC處理組的尼氏體數(shù)量仍有顯著性增加。
　　三、海馬注射區(qū)Aβ免疫組化染色模型組與正常組比較，針道處及灌注部位有明顯的Aβ沉積，并有較多的神經(jīng)元壞死和缺失；PPC處理組與模型組比較，針道處及注射部位Aβ沉積明顯減少，且神經(jīng)元壞死和缺失區(qū)域明顯縮小。PPC處理組與正常對(duì)照組、假手術(shù)組比較，針道處

7、及灌注部位有少量的Aβ沉積，并有少量的組織壞死區(qū)。
　　四、膠質(zhì)細(xì)胞活化改變大鼠海馬CA1區(qū)注射Aβ1-40后，可見注射區(qū)域星形膠質(zhì)細(xì)胞明顯增殖活化，表現(xiàn)為GFAP陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞顯著增多，胞體變大，突起增粗增長；PPC處理后注射區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞活化情況減弱。注射區(qū)域小膠質(zhì)細(xì)胞明顯增殖活化，表現(xiàn)為免疫熒光性Iba1陽性小膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞顯著增多，呈密集小顆粒狀；PPC處理后注射區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞活化情況減弱。
　　五、透射電鏡下突觸

8、超微結(jié)構(gòu)變化正常大鼠海馬CA1區(qū)顯微結(jié)構(gòu)清晰，突觸結(jié)構(gòu)正常，突觸前膜、突觸后膜、突觸間隙及突觸小泡明顯可見；注射Aβ1-40后，CA1區(qū)顯微結(jié)構(gòu)模糊，正常突觸破壞，突觸小泡崩解消失；給予PPC后，混亂的CA1區(qū)顯微結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常，可見明確的突觸前后膜、突觸間隙及突觸小泡。
　　綜上所述，我們的實(shí)驗(yàn)證實(shí)了多烯磷脂酰膽堿從一定程度上減輕了β-淀粉樣蛋白灌注AD模型大鼠的行為學(xué)及形態(tài)學(xué)改變，并且有膠質(zhì)細(xì)胞和和突觸結(jié)構(gòu)的改變。我們的研究是首