腺病毒介導MC148基因?qū)Ζ纶吇蜃拥霓卓棺饔醚芯?pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該課題運用腺病毒作為真核表達載體,將MC148基因進行體內(nèi)外轉(zhuǎn)染,研究其對趨化因子的拮抗作用,以期減少移植物內(nèi)白細胞浸潤,抑制免疫排斥反應,并為進一步運用于基因治療打下基礎.在第一部分實驗中,首先從傳染性軟疣病毒中擴增MC148基因,PCR產(chǎn)物經(jīng)測序后,用BamH I、EcoR I內(nèi)切酶進行雙酶切并與經(jīng)同樣雙酶切的質(zhì)粒載體pUC19連接.重組載體轉(zhuǎn)染JM109大腸桿菌擴增,提取的重組質(zhì)粒進一步對克隆的基因測序.在第二部分實驗中,將已克隆

2、的MC148基因從重組質(zhì)粒pUC19-MC148上酶切下來,末端添平后與cosmid質(zhì)粒pAxCAwt連接構(gòu)建穿梭質(zhì)粒.將此穿棱質(zhì)粒經(jīng)包裝并擴增,提純后與腺病毒DNA-TPC共轉(zhuǎn)染293細胞,通過同源重組成功構(gòu)建了Ad-MC148腺病毒重組體,并進行了克隆篩選和滴度滴定.在第三部分中,Ad-MC148腺病毒重組體轉(zhuǎn)染293細胞大量擴增,上清中提純MC148P蛋白并測定其拮抗β趨化因子MCP-1和RANTES的生物學活性.在第四部分,以大

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