新型腺病毒載體制備及以其為趨化因子基因載體的腫瘤免疫治療和機(jī)制研究.pdf

1、 本研究制備了一種新型纖毛突變型Adv(FM-Adv)，在普通Adv纖毛頭節(jié)區(qū)HI環(huán)上插入了具有整合素特異性的RGD肽，大大提高了對(duì)表達(dá)αv整合素的CAR(-)細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)能力，其對(duì)CAR(-)或CAR弱表達(dá)細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率約為普通Adv的10～1000倍。由于用活化的聚乙二醇(PEG)修飾蛋白質(zhì)和多肽，可提高其體內(nèi)穩(wěn)定性、延長(zhǎng)半衰期、減小免疫原性及抗原性，并對(duì)腫瘤具有一定的被動(dòng)靶向性。所以，在研究中還使用甲氧基聚乙二醇(mPEGs)

2、對(duì)Adv進(jìn)行PEG修飾，制備得到PEG-Adv，大大延長(zhǎng)了Adv的血漿半衰期，并減弱其可能引起的免疫反應(yīng)。但是，Adv在經(jīng)PEG修飾后，病毒顆粒表面PEG鏈產(chǎn)生的立體位阻使其轉(zhuǎn)染能力大大降低。所以，實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步使用RGD-mPEG(未端連接了RGD肽的PEG)對(duì)Adv進(jìn)行PEG修飾，制備得到RGD-PEG-Adv，其基因轉(zhuǎn)導(dǎo)能力與RGD-PEG-Adv相同，同時(shí)具有抵抗抗體中和、巨噬細(xì)胞吞食和血漿半衰期長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)。趨化因子是一類在細(xì)胞的生