miR-365在UVB誘導(dǎo)細(xì)胞損傷中的作用及其與p53關(guān)系的初步研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2009級(jí)碩士學(xué)位論文miR365在UVB誘導(dǎo)細(xì)胞損傷中的作用及其與p53關(guān)系的初步研究TheeffectsofmiR一365incelldamageinducedbyUVBirradiationanditscorrelationwithp53：Apreliminarystudy課題來源：專業(yè)名稱學(xué)位申請(qǐng)人指導(dǎo)教師答辯委員會(huì)主席答辯委員會(huì)成員放射醫(yī)學(xué)江麗紅丁振華教授鄒飛教授陳龍華主任醫(yī)師徐海榮教授楊宇華主任醫(yī)師馮瑞林副主任醫(yī)

2、師周美娟副教授論文評(píng)閱人賈育新主任醫(yī)師周美娟副教授2012年5月31日廣州摘要分子RNA，它廣泛參與調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞凋亡和增殖分化等生物學(xué)過程。近年來對(duì)miRNA的研究和報(bào)道不斷涌現(xiàn)，但是這些主要是集中在對(duì)小部分miRNA的闡述，而對(duì)于大多數(shù)的miRNA知之甚少，仍然存在較大的研究空間。本實(shí)驗(yàn)室以往利用基因芯片技術(shù)比較分析了NIH3T3細(xì)胞在UVB照射前后miRNA表達(dá)譜的差異，結(jié)果顯示：在受到50J／m2UVB照射后，細(xì)胞

3、內(nèi)數(shù)十種miRNA分子均出現(xiàn)了不同程度的表達(dá)變化。而在這些miRNA中，miR365的變化顯著，它在照后6h與對(duì)照組相比升高了6倍多。另外，我們用miRWalk(b主羔乜；』Z翌：堅(jiān)里里：墮旦i二b旦i垡金!墜旦!g：亟皇』壘巳巳墨』圣里!』坐i!塑壘!堡』)和Targetscan(http：／／wWWtargetscanorg／)對(duì)miR一365進(jìn)行靶基因預(yù)測，發(fā)現(xiàn)miR一365與p53調(diào)控的多個(gè)下游基因如bcl2，p21，p63，b

4、ax等都存在可能的結(jié)合位點(diǎn)。因此，我們利用p53差異表達(dá)的兩株MEF細(xì)胞(即p53正常表達(dá)的MEF細(xì)胞和p53低表達(dá)的MEF細(xì)胞)來初步探討UVB，p53和miR一365三者之間的關(guān)系。目的對(duì)miR365是否參與UVB誘導(dǎo)的細(xì)胞生物學(xué)改變進(jìn)程進(jìn)行初步研究，觀察細(xì)胞中p53和miR一365在UVB應(yīng)激下的表達(dá)情況，探討UVB應(yīng)激下p53調(diào)控細(xì)胞周期阻滯過程中miR365的作用。方法1MTT檢測細(xì)胞生存率MEF細(xì)胞接種于96孔板，每孔接種1

5、000個(gè)。待細(xì)胞生長至對(duì)數(shù)增長期時(shí)用不同劑量(10J／m2、30J／m2、50J／m2、70J／m2和100J／m2)的UVB照射MEF細(xì)胞，并繼續(xù)培養(yǎng)24h后，MTT法檢測細(xì)胞存活率；用50J／m2UVB照射MEF細(xì)胞后繼續(xù)培養(yǎng)，在照后不同培養(yǎng)時(shí)間(2h、4h、6h、8h、12h、24h、36h和48h)使用MTT法檢測細(xì)胞存活率。兩種處理均以未受照組作為對(duì)照。2流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期分布分別于照前和照后6h、12h、18h、24h收