白及微球實驗研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 白及多糖的提取與純化
　　目的:分離純化白及多糖。材料與方法:60℃熱水回流提取,Savage法脫蛋白,石油醚脫脂,活性碳脫色,陰離子交換纖維素柱(DE-52)和凝膠柱(Sephadex G-100)層析得白及多糖。結果:熱水提取的白芨多糖為乳白色無嗅無味粉末,經(jīng) DE-52柱和Sephadex G-100柱層析得均一組分,白及多糖的平均得率為(1.9+0.2)％。結論:該方法

2、簡單方便、穩(wěn)定可行,提取的白及多糖可供制備白及微球。
　　第二部分 白及多糖的體外抗腫瘤實驗研究
　　目的:探討白及多糖的抗腫瘤作用。材料與方法:體外細胞培養(yǎng)的人胃癌細胞(sgc)、人卵巢癌細胞(A2780)和肝癌細胞(HepG2)經(jīng)不同劑量白及多糖處理后,應用MTT法測定細胞的增殖情況,流式細胞儀測定白及多糖對三種腫瘤細胞周期的影響。結果:白及多糖對人胃癌細胞、人卵巢癌細胞和肝癌細胞的增殖抑制作用具有時間及劑量依賴性。流式

3、細胞檢測顯示經(jīng)200ug/ml白及多糖作用72h后,人胃癌細胞 G0/G1期細胞增多, S期細胞無明顯變化,G2/M期細胞減少;人卵巢癌細胞 S期細胞增多,G2/M期細胞減少,G0/G1期細胞無明顯變化;肝癌細胞 G0/G1期細胞增多,S期細胞無明顯變化,G2/M期細胞減少。結論:白及多糖可通過抑制人胃癌細胞(sgc)、人卵巢癌細胞(A2780)和肝癌細胞(HepG2)的生長增殖、細胞周期阻滯作用發(fā)揮抗腫瘤作用。
　　第三部分 白

4、及微球的制備及其表征
　　目的:制備白及微球并觀察其表征。材料與方法:乳化-冷凝-化學交聯(lián)法制備空白白及微球,單因素及正交實驗對制備工藝進行優(yōu)化。激光粒度儀測定微球大小,觀察微球分散性、懸浮性和沉降時間、吸水溶脹率、導管推注表現(xiàn)及溶解時間。結果:水、油相比和白及多糖濃度對微球粒徑及產(chǎn)率影響較大。微球在生理鹽水與造影劑歐乃派克中形成不穩(wěn)定懸液,分散性良好,沉降時間與粒徑成正比。微球在生理鹽水中溶脹速度快于造影劑中,不同 pH值時溶脹

5、率無明顯變化。微球較容易通過5F導管,但大于400um的微球吸水后難以通過3F微導管,約6周后微球完全融解。結論:改良法制備的白及微球符合栓塞劑的基本特征。
　　第四部分 白及微球的生物相容性實驗研究
　　目的:研究白及微球的生物相容性。材料與方法:行白及微球熱原試驗,MTT法觀察白及微球對小鼠成纖維細胞、人臍靜脈血管內皮細胞增殖的影響。觀察白及微球的血液相容性。評價白及微球種植于日本大白兔背部肌肉內的組織炎癥反應和栓塞日本

6、大白兔右腎動脈后動脈管壁變化。結果:白及微球對鼠成纖維細胞、人臍靜脈血管內皮細胞增殖無明顯影響,血液相容性良好,無溶血現(xiàn)象。大白兔肌肉植入部位大體觀察無異常,病理學檢測組織炎癥反應程度低,栓塞日本大白兔腎動脈后見腎血管管壁炎性反應輕微,肝、腎功能較快恢復正常水平。結論:白及微球生物相容性良好,可作為中期栓塞劑應用于臨床。
　　第五部分 白及微球對日本大白兔腎動脈栓塞的實驗研究
　　白及微球栓塞日本大白兔腎動脈的實驗研究見我科

7、宋松林碩士畢業(yè)論文。
　　第六部分 白及微球對兔 VX2移植性肝癌栓塞治療效果的實驗研究
　　目的:評價白及微球對兔 VX2移植性肝癌的栓塞治療效果。材料與方法:建立15只日本大白兔 VX2移植性肝癌模型,平均分為3組,A組經(jīng)肝動脈灌注生理鹽水,B組經(jīng)肝動脈注入超液態(tài)碘油+阿霉素,C組經(jīng)肝動脈注入白及微球栓塞治療(200um)。術前及術后2w分別用MRI檢測腫瘤大小并計算腫瘤生長率;復查 DSA檢測栓塞維持時間、腫瘤血管有無

8、再通和側枝循環(huán)情況。病理學觀察組織形態(tài),栓塞劑分布;免疫組化染色檢測腫瘤細胞凋亡、凋亡相關因子 Bax、bcl-2及腫瘤血管細胞內皮生長因子(VEGF)。結果:兔 VX2移植性肝癌荷瘤兔術后2w腫瘤增長率、凋亡率、凋亡相關因子 bax、bcl-2及VEGF組間兩兩比較 B、C組無明顯差異(P>0.05),B、C組與 A組差異有明顯統(tǒng)計學意義(P<0.05)。2w后復查造影白及微球栓塞組腫瘤血管無再通,無側枝循環(huán)血管形成,腫瘤組織壞死并被

9、無結構組織代替,腫瘤血管內可發(fā)現(xiàn)白及微球。結論:白及微球使用方便、安全,栓塞血管效果良好,是一種理想的外周血管栓塞劑。白及微球對兔VX2移植性肝癌栓塞治療效果良好。
　　第七部分 白及微球對日本大白兔子宮肌瘤栓塞治療的實驗研究
　　目的:探討建立日本大白兔子宮肌瘤動物模型和白及微球經(jīng)動脈栓塞治療日本大白兔子宮肌瘤模型的可行性。材料與方法:20只雌性日本大白兔,實驗組15只采用雌孕激素聯(lián)合法誘導建立子宮肌瘤模型,5只后大腿肌肉

10、注射生理鹽水設為對照組。20周后實驗組剩下10只實驗兔,然后平均分成兩組,A組在雙側髂內動脈注入白及微球行栓塞治療(200um),B組在雙側髂內動脈注入PVAs(300um)設為對照組。介入栓塞術后第二天處死實驗兔,病理學觀察組織形態(tài),栓塞劑分布,免疫組化染色檢測雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)。結果:成功建立10只子宮肌瘤模型,造模成功率為66.7％。實驗組大體觀子宮明顯腫脹、結節(jié)形成;鏡下觀察子宮平滑肌增生,細胞排列紊亂,平滑