ChABC緩釋微球促大鼠損傷脊髓再生修復(fù)的實驗研究.pdf

1、目的：①制備ChABC緩釋微球，考察其外觀形態(tài)、粒徑分布、載藥量、包封率及體外釋藥特性以用于進一步的大鼠脊髓損傷動物實驗研究。②探討ChABC緩釋微球促進大鼠損傷脊髓再生修復(fù)的作用。 方法：①通過復(fù)乳法制備ChABC緩釋微球，使用掃描電鏡及激光粒度分布儀觀察微球形態(tài)并測定其粒徑分布；考察微球載藥量、包封率等指標(biāo)；并以生理鹽水作為體外降解介質(zhì)，采用酶活性測定方法初步研究ChABC緩釋微球體外釋藥特性。②采用大鼠T<,10>脊髓完全

2、橫斷傷模型，將大鼠分為正常組(N)、假手術(shù)組(S)、單純損傷組(L)、ChABC單劑組(C)、ChABC緩釋微球組(M)。N組：不進行任何干預(yù)處理；S組：只咬除T<,8～9>椎板，不損傷脊髓；L組：脊髓橫斷后，斷端局部使用生理鹽水；C組：脊髓橫斷后，斷端局部使用ChABC； M組：脊髓橫斷后，斷端局部使用ChABC緩釋微球。于大鼠脊髓損傷術(shù)后每周行BBB運動功能評分。損傷后4w，每組行CS56免疫組化染色，損傷后10w，每組行TMRDA

3、順行示蹤，CSEP誘發(fā)電位檢查，及NF200、GAP43、GFAP免疫組化檢查，并采用免疫組化圖像分析系統(tǒng)進行定量分析。 結(jié)果：①采用復(fù)乳法制備的ChABC的PLGA緩釋微球，其表面光滑圓整，顆粒規(guī)則無粘連，微球大小較均勻，粒徑分布較窄；微球的平均載藥量為15.55±0.90％，平均包封率為53.884±1.45；微球冷凍干燥后，.再分散性良好，外形美觀；微球體外釋藥研究表明，載藥微球在3w內(nèi)的累積釋藥分?jǐn)?shù)為0.8514，釋藥過

4、程較為平穩(wěn)，其體外釋藥符合Weibull方程并能達(dá)到有效的治療濃度。②BBB運動功能評分：術(shù)后10w，三組比較具有統(tǒng)計學(xué)差異：兩兩比較，M組與L組、C組與M組具有統(tǒng)計學(xué)差異。③CSEP誘發(fā)電位檢查：正常組大鼠CSEP檢測，主反應(yīng)潛伏期為14.76±1.454ms、主反應(yīng)峰峰值為0.200±0.0318mv。M組主反應(yīng)潛伏期為25.53±2.215ms、、主反應(yīng)峰峰值為0.028±0.003mv，兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義。其它各組均未檢測出C

5、SEP波型。④脊髓標(biāo)本一般觀察：術(shù)后10w取材及HE染色，見各組脊髓橫斷處斷端均已連接，但瘢痕范圍及色澤不同，脊髓橫斷處大量膠質(zhì)細(xì)胞浸潤。⑤TMRDA順行示蹤：各組的熒光含量、強度、形態(tài)分布具有不同特點：正常組大鼠及各脊髓損傷組大鼠的脊髓橫斷傷頭側(cè)可見與脊髓縱軸平行排列的大量強烈連續(xù)線狀熒光；L組脊髓橫斷傷尾側(cè)可見少量中等強度的點狀熒光和稀疏微弱的間斷線狀熒光；C組脊髓橫斷傷尾側(cè)可見中等量中等強度的點線狀熒光和稀疏微弱的間斷線狀熒光；

6、M組脊髓橫斷傷尾側(cè)可見中等量中等強度的連續(xù)線狀熒光。⑥免疫組化結(jié)果及圖像分析顯示：CS56染色：M組總陽性總面積大于C組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；NF200染色：M組總陽性面積大于L組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；GAP43染色：M組總陽性面積大于L組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；GFAP染色：L組、C組、M組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論：①本實驗采用復(fù)乳法，成功制備得到ChABC的PLGA緩釋微球，制備的ChABC緩釋微球各項指標(biāo)達(dá)到預(yù)期要求，可用于進