Nafamostat聯(lián)合甲強(qiáng)龍修復(fù)脊髓損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　探討Nafamostat聯(lián)合甲基強(qiáng)的松龍(Methylprednisolone，MP)修復(fù)脊髓損傷(spinal cord injury, SCI)的實(shí)驗(yàn)作用。
　　方法：
　　雌性Wistar大鼠80只，以IMPACTOR MODEL-Ⅱ建立大鼠T10節(jié)段脊髓損傷模型，隨機(jī)分成4組，每組20只，包括:Ⅰ組，對照組:腹腔注射生理鹽水10mg/kg，損傷后8h給藥一直持續(xù)到2w;Ⅱ組，Nafamostat組:

2、腹腔注射Nafamostat10mg/kg，損傷后8h給藥一直持續(xù)到2w;Ⅱ組，MP組:尾靜脈注射MP30mg/kg,損傷后8h給藥一次;Ⅳ組，聯(lián)合用藥組:腹腔注射Nafamostat10mg/kg，損傷后8h給藥一直持續(xù)到2w，尾靜脈注射MP10mg/kg，損傷后8h給藥一次。術(shù)后第1d、3d、5d、1w、2w、3w、4w、5w、6w、7w、8w采用BBB(Basso-Beattie-Bresnahan)評分對各組大鼠后肢功能恢復(fù)情況

3、進(jìn)行評價(jià)。術(shù)后8w對大鼠脊髓組織行H-E(hematoxylin-eosin，H-E)染色、膠質(zhì)原纖維酸性蛋白和神經(jīng)絲蛋白免疫組織化學(xué)染色，觀察脊髓空洞、膠質(zhì)瘢痕、神經(jīng)元存活，LFB(Luxol Fast Blue，LFB)染色觀察皮質(zhì)脊髓束，TUNEL(terminaldeoxynucleotidal transferase-mediated DUTP-biotin nick end labeling)染色判斷脊髓損傷后組織細(xì)胞凋亡情

4、況。
　　各種免疫熒光染色數(shù)字圖像結(jié)果經(jīng)Image-Pro Plus6.0專業(yè)圖像分析軟件進(jìn)行分析，以免疫陽性反應(yīng)的累積光密度和陽性反應(yīng)面積分別進(jìn)行比較。采用方差分析對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，比較各組的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　脊髓損傷大鼠術(shù)后8wBBB評分為對照組5.53±1.18，Nafamostat組8.65±1.50，MP組8.06±1.16，聯(lián)合用藥組10.70±1.22

5、，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HE染色結(jié)果顯示Nafamostat組、MP組、聯(lián)合用藥組脊髓空洞面積與數(shù)量明顯小于對照組，聯(lián)合用藥組空洞面積與數(shù)量少于其余3組。GFAP(glial fibrillaryacidic protein，GFAP)免疫組化染色結(jié)果顯示Nafamostat組、MP組、聯(lián)合用藥組膠質(zhì)瘢痕形成數(shù)量相對于對照組明顯減少，聯(lián)合用藥組膠質(zhì)瘢痕數(shù)量少于Nafamostat組/MP組。NF-200免疫組化染色結(jié)果顯示

6、染色結(jié)果顯示Nafamostat組、MP組、聯(lián)合用藥組與對照組相比神經(jīng)細(xì)胞存留數(shù)量更多，聯(lián)合用藥組殘存神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量多于Nafamostat組/MP組，神經(jīng)元能夠發(fā)出更長的軸突。LFB染色顯示聯(lián)合用藥與Nafamostat組/MP組相比保留髓鞘的范圍更大，有更多纖維束通過損傷中心。TUNEL染色結(jié)果顯示聯(lián)合用藥與Nafamostat組/MP組相比凋亡細(xì)胞數(shù)量更少。
　　結(jié)論：
　　聯(lián)合應(yīng)用Nafamostat和MP治療大鼠脊髓