中國野生篤斯越橘花青素的提取分離、組分分析及抗氧化活性的研究.pdf

1、本研究以新鮮干凈的野生越橘果經(jīng)勻漿破碎、離心分離出來的果渣為原料，用預(yù)冷的丙酮提取越橘原花青素，其最佳提取工藝參數(shù)為提取溫度4℃，提取溶劑75％丙酮，料液比1:3(V:V)，提取時間1 h。反應(yīng)液離心收集上清，過濾、真空濃縮至丙酮全部蒸出，回收的丙酮可重復(fù)利用，濃縮液經(jīng)混合非極性溶劑萃取后，即得越橘原花青素上柱液。 HP-2MG型大孔吸附樹脂對越橘原花青素的純化效果最好，吸附率90.8％，解吸率96.0％。大孔吸附樹脂濕法裝柱

2、，預(yù)處理后備用。在濃縮萃取液上柱前，先將柱子用通入氮氣的脫氧水洗脫1～2個體積，以排除柱中氧氣，防止越橘原花青素被氧化，且將柱子用錫箔紙包裹，達(dá)到避光效果。上柱至大孔樹脂吸附飽和，再用通入氮氣的脫氧水沖洗至沖洗液無明顯顏色。然后再用10％—50％—75％—95％乙醇進(jìn)行沖洗，各濃度乙醇pH3～6，且保持通入氮氣，以保持體系的穩(wěn)定性。以0.5～4個柱體積/小時的速度洗脫，收集洗脫液。洗脫液顏色很淺時，停止上柱，記錄各洗脫液體積。將收集到的

3、10％、50％、75％、95％的洗脫液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮；將濃縮液冷凍干燥，程序為： -40℃→-30℃→-20℃→-10℃→-5℃ 2h2h2h2h10h用香草醛法測得其總黃烷醇含量為95％，其得率為0.72％。 采用反相高效液相色譜法和電噴霧質(zhì)譜法對中國野生篤斯越橘中花青素組分進(jìn)行分離和分析。經(jīng)HP-2MG型大孔吸附樹脂柱層析得到越橘花青素樣品溶液，采用Alltima C18反相色譜柱(250 mm×4.6

4、 mm，5μm)，以2％甲酸水溶液(A)和2％甲酸/甲醇溶液(B)作為流動相，分2個梯度對花青素組分進(jìn)行洗脫，將其主要洗脫峰在電噴霧正離子模式下進(jìn)行分析，根據(jù)質(zhì)譜的準(zhǔn)分子離子[M+H](m/z)檢測其聚合度。結(jié)果表明野生越橘花青素的提取物被展開成8個主要的洗脫峰，以峰面積計算，主要洗脫峰總含量達(dá)85％。經(jīng)質(zhì)譜分析，其中4號峰、8號峰、12號峰的質(zhì)譜及碎片信息表明，它們是原花青素單體，6號峰、10號峰的質(zhì)譜及碎片信息表明，它們是原花青素二

5、聚體，7號峰的質(zhì)譜及碎片信息表明，它們是原花青素三聚體，13號峰和14號峰的質(zhì)譜及碎片信息表明，它們是原花青素四聚體。結(jié)果表明我國野生篤斯越橘中含有較豐富的花青素，低聚體是其中的主要成分。本實驗結(jié)果為進(jìn)一步研究我國大興安嶺野生篤斯越橘花青素的組成情況提供了依據(jù)，對于開展其后續(xù)的結(jié)構(gòu)、功能、質(zhì)量檢測以及生產(chǎn)開發(fā)研究都具有一定的參考價值。 為進(jìn)一步研究越橘原花青素的性質(zhì)，本研究以本實驗室制備的越橘原花青素單體——兒茶素與表兒茶素的混

6、合物(記為PCM組)、越橘原花青素的二聚體各異構(gòu)體的混合物(記為PCD組)、聚合度>2的越橘原花青素混合物(記為PCT組)為研究對象，對越橘原花青素做還原能力的測定。實驗結(jié)果表明：隨著越橘原花青素聚合度的相對平均分子質(zhì)量降低和相對分子質(zhì)量分布變窄，其還原能力增強(qiáng)即PCM