Exosome用于抗HBV免疫治療的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的: 初步探索Exosome體外抗HBV特異性免疫活性。 方法: 以細(xì)胞因子GM-CSF、IL-4及TNF-α培養(yǎng)健康人PBMC來(lái)源的DCs，通過流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞表型判斷所收獲的DCs成熟度；采用多步驟離心法分離純化DCs培養(yǎng)上清中的Exosome，western blotting分析蛋白性質(zhì)；以HBcAg刺激DCs，MTS法檢測(cè)收獲的HBcAg特異性DEXs刺激PBMC增殖的能力、ELISPOT法檢測(cè)HBc

2、Ag特異性DEXs刺激的PBMC產(chǎn)IFN-γ的能力。 結(jié)果: 成熟DC表面HLA-DR、CD80/CD86及CD83分子的表達(dá)水平明顯高于未成熟DC者(分別為45.3±8.3％vs 16.5±6.8％、90.2±6.5％/92.38±13.6％vs 6.3±4.5％/49.8±9.2％、83.53±10.8％vs 4.3±2.8％，P<0.05)；成熟DCs分泌的Exosome表達(dá)HLA-DR、CD86分子也強(qiáng)于未成熟D

3、Cs分泌者；淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示HBcAg特異性DEXs體外刺激PBMC增殖能力強(qiáng)于未成熟者(吸光度0.904±0.003 vs 0.545±0.010，P<0.001)，但不如HBcAg特異性mDCs(0.904±0.003 vs 1.034±0.004，P<0.05)；HBcAg特異性DEXs刺激的PBMC產(chǎn)IFN-γ能力強(qiáng)于未成熟者(斑點(diǎn)數(shù)32±13 vs 14±2，P<0.05)，但也不如HBcAg特異性mDCs(32±13