乙型肝炎病毒全基因組轉(zhuǎn)基因小鼠的病理及免疫學(xué)特征研究.pdf

1、人類乙型肝炎病毒(hepatic B virus,HBV)是一種嗜肝非細(xì)胞毒性DNA病毒。根據(jù)外膜蛋白上氨基酸序列的不同,HBV至少可分為四種血清亞型:ayw、adr、ayr和adw,在我國主要以adr亞型為主。 HBV感染嚴(yán)重威脅著人類的健康,目前全世界大約有3.5億人感染HBV,尤其在亞洲和非洲其感染率很高。在我國HBV的感染率約為10％,現(xiàn)有大約3000萬慢性乙型肝炎患者。由于每個(gè)人的體質(zhì)不同,所以人類乙型肝炎病毒導(dǎo)致的肝

2、病嚴(yán)重程度也不一樣。有些人在感染乙肝后能在沒有明顯臨床病癥的情況下從血液中清除病毒,或者在感染急性肝炎的情況下痊愈而不留下長期的臨床后遺癥；而有些患者就不能清除病毒并發(fā)展為慢性感染,大多數(shù)慢性感染患者處于無癥狀狀態(tài)而沒有生命危險(xiǎn),10-30％患者發(fā)展為肝硬化并可能進(jìn)展為肝癌。由于缺乏比較理想的HBV感染模型,嚴(yán)重制約了對(duì)HBV發(fā)病機(jī)制和抗病毒治療的深入研究。 研究能夠表達(dá)HBV基因或復(fù)制整個(gè)病毒基因組的一些動(dòng)物模型,比如與肝DN

3、A病毒屬感染相關(guān)的動(dòng)物模型以及轉(zhuǎn)基因小鼠模型,能夠使我們對(duì)HBV感染有更好的認(rèn)識(shí)。此外,在活體外通過對(duì)人和黑猩猩抗原特異T細(xì)胞的直接量化來分析免疫現(xiàn)象的能力也能夠增加我們對(duì)于HBV發(fā)病機(jī)理的認(rèn)識(shí)。HBV轉(zhuǎn)基因小鼠對(duì)研究乙肝的發(fā)病機(jī)制起了極大的推動(dòng)作用,國內(nèi)外學(xué)者相繼建立了一些比較理想的乙肝轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型。 本實(shí)驗(yàn)室自1992開始,相繼研發(fā)了多種品系的乙肝轉(zhuǎn)基因小鼠,其中整合雙拷貝的全長HBV基因組DNA(adr亞型)的乙肝轉(zhuǎn)基因

4、小鼠C57-TgN(HBVadr2.0)SMMU“3號(hào)”品系具有類似慢性無癥狀HBV攜帶者(chronic asymptomatic HBV carrier,AsC)的多種生物學(xué)特性。這一品系的主要特點(diǎn)有:HBV基因在小鼠基因組中整合并穩(wěn)定遺傳；血清HBsAg、HBeAg陽性；抗HBs和抗HBe均陰性；肝組織中有HBsAg、HBcAg、X蛋白表達(dá)；血清中存在HBV DNA,肝組織中存在病毒樣顆粒。但與以往研究結(jié)果不同,部分轉(zhuǎn)基因小鼠肝組

5、織出現(xiàn)了輕重不等的病理學(xué)改變。 本課題利用我們實(shí)驗(yàn)室建立并優(yōu)選的乙肝全基因組轉(zhuǎn)基因小鼠C57-TgN(HBVdr2.0)SMMU“3號(hào)”品系的F14-F20代小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,從蛋白質(zhì)、病理學(xué)和免疫學(xué)角度,綜合分析該品系轉(zhuǎn)基因小鼠的免疫病理學(xué)特性,使其成為可應(yīng)用于乙型肝炎病毒相關(guān)研究的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。 通過130例SPF級(jí)乙型肝炎轉(zhuǎn)基因小鼠和10只同齡正常C57BL/6小鼠肝組織進(jìn)行HBsAg表達(dá)、H-E染色和浸銀染色分析,

6、光鏡觀察,并按病理改變嚴(yán)重程度、月齡等分組,分析肝臟病變、月齡、性別、HBsAg表達(dá)等因素之間的關(guān)系。結(jié)果顯示： 與對(duì)照小鼠相比,轉(zhuǎn)基因小鼠肝組織出現(xiàn)了類似人慢性乙型肝炎攜帶者的病理改變,60.77％(79/130)的乙肝小鼠出現(xiàn)比較明顯的肝細(xì)胞變性壞死、單個(gè)核細(xì)胞浸潤和纖維增生。不同月齡組的轉(zhuǎn)基因小鼠肝組織學(xué)表現(xiàn)各不相同,且與月齡正相關(guān)。而肝組織的病理改變與性別、病毒蛋白的表達(dá)并無相關(guān)性。這些結(jié)果表明,轉(zhuǎn)基因小鼠發(fā)生了與人類慢

7、性HBV無癥狀攜帶者相似的肝組織病理性損傷,總體為輕度慢性肝炎。選取出現(xiàn)單個(gè)核細(xì)胞浸潤的肝組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn),肝組織中浸潤的單個(gè)核細(xì)胞大多為CD3+、CD4+T細(xì)胞。 通過本課題的研究提示我們：我們實(shí)驗(yàn)室建立的C57-TgN (HBVdr2.0)SMMU“3號(hào)”品系乙肝全基因組轉(zhuǎn)基因小鼠肝臟產(chǎn)生類似慢性無癥狀HBV攜帶者的病理學(xué)變化,病理改變與病毒蛋白表達(dá)無相關(guān)性,與小鼠月齡呈正相關(guān)性。CD3+、CD4+T細(xì)胞參與了肝