AML1-ETO上調(diào)Cx43表達與凋亡過程中hnRNPK下調(diào)的分子機制研究.pdf

1、白血病是嚴重危害人類健康的惡性疾病。對白血病發(fā)病和細胞凋亡的分子機制研究一直是研究的熱點。本課題分別就（1）白血病相關(guān)融合蛋白AML1-ETO上調(diào)Cx43表達的分子機制和（2）白血病細胞凋亡過程中hnRNP K蛋白下調(diào)的分子機制進行了初步研究。 第一部分研究了AML1-ETO上調(diào)Cx43表達的分子機制。Cx43是構(gòu)成細胞間縫隙連接的成分之一，屬于連接蛋白（Connexin，Cx）家族。在人類Cx家族中，Cx43研究得最為深入。除

2、了參與組成縫隙連接外，越來越多的證據(jù)表明Cx43以依賴或不依賴縫隙連接的方式抑制細胞增殖，參與多種疾病的發(fā)生，發(fā)展。本課題組最近的研究表明：t（8；21）易位產(chǎn)生的白血病相關(guān)融合蛋白AML1-ETO可以明顯上調(diào)Cx43的表達。但是，AML1-ETO上調(diào)Cx43表達的確切機制尚未闡明。為此，本課題對AML1-ETO誘導(dǎo)Cx43表達的分子機制進行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)AML1B、AML1-ETO都能通過AML1順式作用元件與Cx43基因啟動子相結(jié)合

3、；但只有AML1-ETO對該基因有轉(zhuǎn)錄活性；而且這種轉(zhuǎn)錄活性不依賴于AML1-ETO對Cx43基因啟動子的結(jié)合；而是通過激活JNK信號傳導(dǎo)通路上調(diào)Cx43的表達。這些結(jié)果為深入認識AML1-ETO相關(guān)的白血病發(fā)生機制提供了新的線索。 第二部分研究了白血病細胞凋亡過程中hnRNP K蛋白下調(diào)的分子機制。核內(nèi)不均一核糖核蛋白K（heterogenous nuclear ribonucleoprotein K，hnRNP K）屬于核內(nèi)

4、不均一核糖核蛋白(hnRNP)家族，該家族是一類具有類似結(jié)構(gòu)特征RNA結(jié)合蛋白。它們在DNA修復(fù)、端粒的生成、細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及基因表達的轉(zhuǎn)錄與翻譯水平上發(fā)揮著重要作用。本課題組通過同位素編碼親和標簽質(zhì)譜技術(shù)發(fā)現(xiàn)NB4細胞經(jīng)凋亡誘導(dǎo)劑NSC606985處理后，hnRNP K明顯下調(diào)。鑒于PKCd剪切活化片斷及活化的caspase-3在NSC606985誘導(dǎo)的細胞凋亡中發(fā)揮重要作用，我們探討了PKCd剪切活化片段、活化的caspase-3與h

5、nRNP K下調(diào)的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不僅凋亡誘導(dǎo)劑NSC606985處理NB4細胞，導(dǎo)致hnRNPＫ顯著下調(diào)；而且凋亡誘導(dǎo)劑As2O3 ，阿霉素和紫外線處理NB4細胞都可致hnRNPＫ下調(diào)。進一步地，在NSC606985誘導(dǎo)NB4、U937細胞凋亡過程中，發(fā)現(xiàn)hnRNPＫ的下調(diào)發(fā)生在PKCd、caspase-3活化之后；PKCd、caspase-3特異性抑制劑Rottlerin、Z-DEVD-FMK能夠抑制NSC606985引起的hnRNP

6、Ｋ下調(diào)；用NSC606985處理PKCd缺陷細胞KG1a，在caspase-3活化，PARP發(fā)生剪切時，hnRNPＫ并不下調(diào)；而在U937TPKCδ-CAT細胞中誘導(dǎo)表達PKCd活化片斷時，hnRNPＫ蛋白是下調(diào)的，mRNA水平無明顯改變；蛋白酶體抑制劑PS341、MG132明顯抑制凋亡過程中hnRNPＫ的下調(diào)。 綜合上述研究結(jié)果，本文得出結(jié)論：NSC606985等凋亡誘導(dǎo)劑能明顯下調(diào)hnRNP K表達；NSC606985主要通