Vps18在小腦浦肯野細(xì)胞發(fā)育及肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用.pdf

1、第一部分 Vps18在小鼠小腦浦肯野細(xì)胞發(fā)育中的功能研究
　　溶酶體在機(jī)體防御外來(lái)入侵物質(zhì)、營(yíng)養(yǎng)吸收、回收衰老損壞細(xì)胞器、胞內(nèi)信號(hào)調(diào)控等多個(gè)方面都發(fā)揮著重要作用，多種疾病的發(fā)生被認(rèn)為與溶酶體功能缺陷相關(guān)，比如阿茲海默癥及糖原貯積癥。Vps18蛋白是組成C類(lèi)Vps蛋白復(fù)合物的四個(gè)亞基之一，在溶酶體的多種形成途徑中扮演著重要的角色。我們之前的研究發(fā)現(xiàn)，在小鼠神經(jīng)細(xì)胞中使用Nestin-Cre轉(zhuǎn)基因條件性剔除Vps18基因會(huì)導(dǎo)致神經(jīng)細(xì)胞

2、大規(guī)模凋亡，阻礙神經(jīng)前體細(xì)胞的遷移，并導(dǎo)致突變體小鼠在圍產(chǎn)期內(nèi)全部夭折。此外，乳鼠小腦切片的病理學(xué)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，浦肯野細(xì)胞的樹(shù)突發(fā)育也受到了抑制。然而由于Vps18F/F;Nestin-Cre小鼠過(guò)早夭折，我們無(wú)法了解Vps18基因?qū)τ诔錾笃挚弦凹?xì)胞的發(fā)育及行為學(xué)上的影響。因此，為了研究Vps18對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)神經(jīng)的發(fā)育的影響，我們使用Pcp2-Cre轉(zhuǎn)基因在小腦浦肯野細(xì)胞中特異性剔除Vps18基因。我們發(fā)現(xiàn)Vps18F/F; Pcp2-Cr

3、e小鼠是可以長(zhǎng)期生存并是可育的，但行為學(xué)上表現(xiàn)出類(lèi)似于小腦共濟(jì)失調(diào)的表型。然而在三月齡的成年Vps18突變小鼠小腦中，浦肯野細(xì)胞的樹(shù)突發(fā)育則未見(jiàn)與野生型小鼠有明顯差別。這表明了Vps18可能只在浦肯野細(xì)胞發(fā)育早期發(fā)揮作用。此外，我們發(fā)現(xiàn)Lox蛋白在突變小鼠小腦中沉積，這很可能是導(dǎo)致浦肯野細(xì)胞凋亡的原因之一。我們的研究揭示了Vps18蛋白在小腦浦肯野細(xì)胞樹(shù)突發(fā)育過(guò)程中的重要作用，為研究人類(lèi)神經(jīng)退行性疾病，尤其是小腦共濟(jì)失調(diào)提供了新方向與思

4、路。
　　第二部分 Vps18在肺癌發(fā)生發(fā)展中的功能研究
　　溶酶體在維持機(jī)體正常生理功能中起著不可或缺的作用，但其在癌癥發(fā)生發(fā)展中的作用尚不明確。Vps18基因是介導(dǎo)溶酶體成熟的關(guān)鍵蛋白，我們的研究發(fā)現(xiàn)，利用帶有Cre重組酶的腺病毒(Adeno-Cre)在Vp s18F/F小鼠肺中條件剔除Vps18基因并不會(huì)引起癌癥，但在LSL-K-rasG12D小鼠肺中條件性剔除Vps18基因則會(huì)導(dǎo)致肺癌病灶顯著增多增大。TUNEL分析

5、和Caspase3蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)顯示，Vps18蛋白缺失未影響腫瘤細(xì)胞的凋亡，但EdU標(biāo)記實(shí)驗(yàn)顯示腫瘤細(xì)胞的增殖增強(qiáng)。蛋白免疫印跡檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，Vps18缺失的LSL-K-rasG12D小鼠肺癌病灶中表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)明顯積累，且EGFR下游的Stat3轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化水平顯著增強(qiáng)，而這很可能是由于Vps18基因缺失阻斷了內(nèi)吞泡與溶酶體融合而導(dǎo)致的。我們的結(jié)果揭示了Vps18基因在肺癌發(fā)生發(fā)展中的重要作用，為研究溶酶體在癌癥中的