Rho激酶及其異構(gòu)體在腸炎及腸粘膜屏障功能損傷中的作用及機制.pdf

1、研究背景和目的：
　　 腸粘膜屏障功能損傷伴隨著炎癥性腸病的整個過程，其解剖基礎(chǔ)是緊密連接結(jié)構(gòu)的破壞。Rho激酶(ROCK)可通過調(diào)控下游肌球蛋白輕鏈(MLC)的磷酸化狀態(tài)對細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)造成影響，從而在維持緊密連接結(jié)構(gòu)中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。NF-κB作為ROCK的另一下游信號分子同時也是調(diào)控各種炎癥因子分泌的重要轉(zhuǎn)錄因子之一，因此ROCK亦有可能通過激活NF-κB促進腸道的炎癥反應(yīng)。本研究目的在于探討Rho/ROCK在腸道炎癥

2、及腸粘膜屏障損傷過程中的作用及相應(yīng)的作用機制。
　　 研究方法：
　　 60只Balb/c小鼠隨機分為3組：正常對照組(n=10)、模型組(n=30)及Y-27632(n=20)組。模型組及Y-27632組小鼠于第1天以TNBS乙醇溶液灌腸；Y-27632組于第1天至第7天分別腹腔注射10mg/kg的Y-27632 qd。對照組則予以相應(yīng)劑量的生理鹽水處理。各組小鼠均于第8天處死。通過觀察小鼠一般情況、死亡率及腸道炎癥的

3、病理評分評價小鼠腸道炎癥情況；透射電鏡觀察小鼠腸道粘膜的緊密連接形態(tài)；以熒光素標(biāo)記法檢測腸道粘膜通透性；免疫組化法及Realtime-PCR法分別測定緊密連接蛋白ZO-1、Occludin以及相應(yīng)的mRNA表達。通過Western blot法測定ROCK1、ROCK2及其下游因子phospbo-MYPT-1Thr696、phospho-MLC Ser19、IκBα、phospho-IκBα Ser32/36、NF-κB p65及NF-κ

4、Bp65 Ser536的表達。
　　 研究結(jié)果：
　　 模型組小鼠出現(xiàn)明顯肉眼血便，且死亡率明顯高于另外兩組。Y-27632組小鼠腸壁炎癥及腸道通透性較模型組明顯改善。各組小鼠透射電鏡下腸粘膜緊密連接形態(tài)未見明顯差異。模型組小鼠腸壁緊密連接蛋白ZO-1及Occludin表達下降，經(jīng)Y-27632干預(yù)后Occludin表達升高而ZO-1無明顯變化。Y-27632組ROCK1及ROCK2的表達均受到明顯抑制。模型組小鼠腸壁P

5、-MYPT-1 Thr696變化不明顯，而P-MLC Ser19明顯增加，Y-27632組小鼠P-MYPT-1 Thr696及P-MLC Ser19表達均明顯受到抑制。模型組小鼠腸壁IκBα表達較正常組下降，且P-IκBαSer32/36表達明顯減少，下游NF-κB p65表達較正常組增加，P-NF-κB p65 Ser536表達明顯增加；Y-27632干預(yù)組與模型組比較，IκBα表達總量增加且P-IκBαSer32/36表達亦明顯增加

6、，而下游NF-κB p65及P-NF-κB p65 Ser536表達均受到明顯抑制。
　　 結(jié)論：
　　 1.通過抑制ROCK可以緩解TNBS誘導(dǎo)的小鼠腸道炎癥，并可改善腸粘膜通透性。
　　 2.ROCK通過促進下游MYPT-1及MLC的磷酸化，從而改變腸粘膜緊密連接功能，進而影響腸道粘膜屏障功能。
　　 3.ROCK激活后可促進IκBα的總量表達，并可通過促進IκBα Ser32/36磷酸化從而激活I(lǐng)κ