Rho激酶在大鼠腸缺血再灌注肝腸損傷中的作用及法舒地爾預(yù)處理對(duì)其的影響.pdf

1、目的：小腸缺血再灌注（intestinal ischemia reperfusion，IIR）除發(fā)生于腸道及其系膜血管自身疾病外，還可繼發(fā)于多種臨床疾病的病理生理過(guò)程中，引起全身系統(tǒng)性損傷，而肝臟則是腸缺血再灌注損傷的最直接器官。本課題旨在研究Rho激酶（Rho kinase，ROCK）在腸缺血再灌注肝腸損傷中的作用機(jī)制及法舒地爾（Fasudil）預(yù)處理對(duì)腸缺血再灌注肝腸損傷的保護(hù)作用，并在分子水平為該藥物的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

2、 方法：將24只健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組：（1）假手術(shù)組（正常對(duì)照組）；（2）腸缺血再灌注組（I/R組）；（3）低劑量法舒地爾預(yù)處理組（7．5mg/kg）；（4）高劑量法舒地爾預(yù)處理組（15mg/kg）。I/R組及Fasudil預(yù)處理組用無(wú)創(chuàng)的動(dòng)脈夾夾閉腸系膜上動(dòng)脈（superior mesenteric artery，SMA）1h，松夾后再灌注2h，建立大鼠腸缺血再灌注損傷模型：Fasudil預(yù)處理組術(shù)前1h腹腔內(nèi)注射一定量的鹽

3、酸法舒地爾注射液；對(duì)照組僅進(jìn)行剖腹術(shù)及SMA分離術(shù)。再灌注結(jié)束后，采集血液和肝腸組織樣本。光鏡下觀察病理石蠟切片肝、腸組織的形態(tài)學(xué)改變，測(cè)定肝功和肌酸激酶（creatine kinase B，CK-B）水平，測(cè)定肝、腸組織中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性和髓過(guò)氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）活力，檢測(cè)血清中腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-

4、α）和白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）的水平，通過(guò)Western-blotting檢測(cè)組織中內(nèi)皮源性一氧化氮合酶（endothelial NO synthase，eNOS）和Rho激酶（P-Moesin）蛋白表達(dá)的情況。 結(jié)果：1、與假手術(shù)組相比，I/R組：（1）鏡下可見肝、腸組織出現(xiàn)明顯的病理性損傷，表現(xiàn)為肝、腸組織水腫、出血和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。（2）血清酶學(xué)檢測(cè)：血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（Alanine Am

5、inotransferase，ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（Aspartate Aminotransferase，AST）和CK-B的水平均明顯升高（P<0．01，P<0．01，P<0．01），提示肝、腸組織功能嚴(yán)重受損。（3）小腸和肝臟組織中的MPO活力顯著升高（P<0．01，P<0．01），SOD活性明顯降低（P<0．01，P<0．01），表明腸缺血再灌注誘發(fā)肝、腸組織發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化損傷，機(jī)體的氧自由基清除能力下降，白細(xì)胞浸潤(rùn)增多

6、。（4）血清中TNF-α和IL-6的水平明顯升高（P<0．01，P<0．01）。（5）Western-blotting檢測(cè)小腸組織p-Moesin蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)，而肝組織eNOS的表達(dá)顯著減弱、p-Moesin的表達(dá)明顯增強(qiáng)。2、采用法舒地爾預(yù)處理后，與I/R組相比，不同劑量法舒地爾預(yù)處理組：（1）組織形態(tài)學(xué)可見肝、腸組織病理?yè)p傷程度明顯減輕。（2）肝功能有所改善，表現(xiàn)為血清中ALT及AST水平顯著降低（P<0．01，P<0．01）；

7、小腸組織壞死程度減輕，表現(xiàn)為血清中CK-B水平下降（P<0．01）。（3）肝、腸組織氧化損傷及白細(xì)胞浸潤(rùn)程度有所緩解，自由基清除能力增強(qiáng)，表現(xiàn)為組織中MPO活力減少（P<0．01，P<0．01），SOD活性增強(qiáng)（P<0．01，P<0．01），且表現(xiàn)出劑量依賴性。（4）血清中TNF-α和IL-6水平均明顯降低（P<0．01，P<0．01）。（5）小腸組織p-Moesin的蛋白表達(dá)水平明顯減弱；肝組織中eNOS表達(dá)水平顯著增強(qiáng)，p-Moes

8、in表達(dá)水平減弱。 結(jié)論：（1）小腸缺血再灌注可以導(dǎo)致嚴(yán)重的肝腸組織損傷，損傷表現(xiàn)包括中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)聚集、氧化性損傷、細(xì)胞因子激活等。（2）腸缺血再灌注肝腸損傷的機(jī)制較復(fù)雜，其發(fā)生和發(fā)展與Rho/Rho激酶通路的激活有關(guān)。（3）法舒地爾預(yù)處理對(duì)腸缺血再灌注導(dǎo)致的肝腸損傷有明顯的保護(hù)作用，包括氧化性損傷減輕、中性粒細(xì)胞活性減弱、降低TNF-α和IL-6的水平、上調(diào)eNOS活性等。這種保護(hù)作用與Rho激酶的抑制有關(guān)，且呈劑量依賴性。