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文檔簡介
1、目的:觀察腸缺血再灌注術后腸粘膜屏障功能的變化,初步探討腸粘膜屏障的損傷機制,研究免疫營養(yǎng)對腸缺血再灌注大鼠腸粘膜屏障的保護作用,為免疫營養(yǎng)的臨床應用提供實驗基礎。
方法:本實驗選用雄性SD大鼠50只,按隨機原則分為五組,每組10只:①正常對照組(C):正常飼養(yǎng)進食。②腸系膜上動脈夾閉+胃造瘺+普通腸內營養(yǎng)組(LMSA-EN);③腸系膜上動脈夾閉+胃造瘺+免疫增強腸內營養(yǎng)組(LMSA-EIN);④胃造瘺+普通腸內營養(yǎng)組(E
2、N);⑤胃造瘺+免疫增強腸內營養(yǎng)組(EIN);建立大鼠腸缺血再灌注模型,分別給予不同營養(yǎng),術后1、4、7天分別取外周血,流式細胞術檢測T細胞亞群。ELISA法檢測血漿內毒素、腫瘤壞死因子α、白介素1β、二胺氧化酶、D乳酸;各組大鼠于術后7天斷頸處死,消毒,然后分別切取末端回腸及結腸各3cm(距回盲部3cm),行HE及免疫組織化學染色,檢測Occludin和sIgA表達水平。
結果:
1.體重變化:術后體重較術
3、前減輕(P<0.05),LMSA-EN組較LMSA-EIN組減輕明顯(18.20±7.61 vs12.00±3.86,P<0.05);EN組較EIN組減輕明顯(13.40±2.59vs7.60±5.38,P<0.05)。
2.腸粘膜病理改變:各組大鼠小腸粘膜厚度、絨毛高度、隱窩深度比較,腸缺血模型組較對照組均有不同程度下降,存在顯著性差異,且LMSA-EN組下降較LMSA-EIN組明顯,差異有統(tǒng)計學意義。
3
4、.腸粘膜病理損傷評分:各組間存在顯著性差異,LMSA-EN組病理損傷評分顯著高于C組(30.70±4.45 vs14.70±3.16,P<0.01);LMSA-EIN組的病理損傷評分顯著低于LMSA-EN組(25.60±4.33 vs30.70±4.45,P<0.05);EIN組的病理損傷評分顯著低于EN組(16.30±2.75 vs22.40±2.67,P<0.01)。
4.免疫組化染色:Occludin免疫組化染色以上
5、皮細胞胞膜及胞質棕黃色顆粒為陽性細胞,各組均可見有陽性表現(xiàn),組間陽性細胞百分率存在顯著性差異,LMSA-EIN較LMSA-EN組升高(P<0.01);EIN較EN組升高(P<0.05);sIgA免疫組化染色以上皮細胞及漿細胞棕黃色顆粒為陽性細胞,各組均可見有陽性表現(xiàn),組間陽性細胞百分率存在顯著性差異,LMSA-EIN較LMSA-EN組升高(P<0.05);EIN較EN組升高(P<0.05)。
5.外周血CD4+/CD8+:
6、各組間存在顯著性差異,LMSA-EN組較術前有所降低(P<0.05),LMSA-EN組降低較LMSA-EIN組明顯(P<0.05),EN組降低較EIN明顯(P<0.05)。
6.術后血漿內毒素、TNF-α、IL-1β、DAO、D乳酸均較術前明顯增高,第1、4、7天逐漸降低,免疫營養(yǎng)組下降較普通營養(yǎng)組明顯,但仍高于術前水平,差異有統(tǒng)計學意義。
結論:
1.成功建立大鼠腸粘膜缺血再灌注模型,大鼠術后
7、體重下降,小腸形態(tài)學改變表現(xiàn)為絨毛壞死,隱窩消失,腸屏障功能改變表現(xiàn)為機械屏障功能受損(腸粘膜Occludin蛋白表達減少)、腸免疫屏障受損(腸粘膜sIgA含量下降,T細胞亞群降低,腫瘤壞死因子α、白介素1β等不同程度升高),同時發(fā)生腸粘膜通透性改變(內毒素、D乳酸升高)等。
2.腸內營養(yǎng)能在一定程度上保護腸粘膜屏障功能。
3.免疫營養(yǎng)進一步減輕腸缺血導致大鼠腸粘膜的破壞,減輕體重丟失;增加大鼠腸粘膜Occl
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